产品原理
基于实时荧光定量PCR技术，采用TaqMan探针法检测靶序列。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。通过监测荧光强度变化，实现对巴戟天特异性DNA片段的定性与定量分析。
产品名称 | 巴戟天探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Radix Morindae Officinalis Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5210 |
产品组成
探针法qPCR缓冲液（500μL）
qPCR酶混合液（100μL，含逆转录酶、Taq DNA聚合酶）
荧光PCR模板稀释液（1mL）
巴戟天特异性引物混合液（100μL）
巴戟天qPCR探针（50μL）
阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，50μL）
说明书（1份）
实验流程
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度需更换无菌带芯枪头。
稀释操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。
2. 样本DNA提取
推荐使用柱式DNA提取试剂盒，制备N+2份样本（含阴性/阳性对照）。
阴性对照：超纯水；阳性对照：试剂盒提供的阳性标准品稀释液。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| qPCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 样本DNA/标准品/水 | 5 | 5（水） | 5（梯度标准品） |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |
数据分析
定量检测：以标准品log拷贝数为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性判定：
阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型；
阴性：Ct≥40或无扩增；
可疑（35<Ct<40）：需重复检测。
注意事项
实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。
探针避光保存，反复冻融不超过3次。
阳性对照需最后加入，防止污染其他反应管。
若扩增效率异常（标准曲线R²<0.98），需检查稀释准确性或试剂活性。
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