产品基本信息

检测方法:TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR
适用目标:小反刍兽疫病毒(PPRV)通用型及疫苗株RNA
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融(≤5次),有效期12个月。
产品名称 | 小反刍兽疫病毒疫苗株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Peste des Petits Ruminants Virus Vaccine Strain Probe-based Real-time RT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR5220 |

试剂盒组成

反应液:含特异性引物及探针(FAM通道检测)。
酶液:逆转录酶与Taq DNA聚合酶混合液。
阳性质控品:PPRV疫苗株RNA阳性对照。
阴性质控品:无核酸酶水阴性对照。
注:不同规格(25T/50T)组分体积差异,具体以包装标注为准。
样本要求
适用样本类型:
动物组织(脾脏、扁桃体、淋巴结等病变与健康交界处);
全血、分泌物。
样本处理:
推荐使用磁珠法或离心柱法提取RNA,避免DNA污染。
提取后RNA应保存于-80℃,避免降解。
操作步骤

RNA提取:
使用TRIZOL法或商用提取试剂盒,注意避免RNA酶污染。
紫外分光光度法检测RNA纯度(A260/A280比值1.8-2.1)。
RT-PCR反应体系配制:
每反应管加入19μL反应液 + 1μL酶液 + 5μL模板RNA(总体系25μL)。
扩增程序设置:
逆转录:50℃ 30分钟(可选);
预变性:95℃ 2分钟;
循环:95℃ 15秒 → 60℃ 30秒(收集荧光),共45循环。
结果判读
阳性:Ct值≤40,扩增曲线呈指数增长。
可疑:40<Ct≤45,需重复检测确认。
阴性:无Ct值或扩增曲线平直。
质控要求:
阴性质控品无扩增;
阳性质控品Ct值≤32。
注意事项

分区操作(样本处理、试剂配制、扩增),避免交叉污染。
使用一次性耗材,实验后工作台需用10%次氯酸或75%乙醇消毒。
若样本出现降解或抑制剂干扰(如A260/A280异常),需重新提取。
试剂解冻后需混匀离心,避免气泡影响扩增效率。
局限性声明
检测结果需结合临床症状及其他实验室检测综合判断。
病毒变异可能导致假阴性,建议定期验证引物探针匹配性。
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