蟹源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

蟹源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于检测样品中蟹源性成分的核酸序列。通过特异性引物与荧光标记探针的结合，实现对目标DNA的高灵敏度、高特异性定量分析。适用于食品、饲料等样品的成分鉴定及科研用途，严禁用于临床诊断。

技术原理

探针法设计：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，信号强度与扩增产物量成正比。

实时定量：通过监测荧光信号增长（Ct值），结合标准曲线计算起始模板浓度。

产品组成

| 成分 | 规格 | 保存条件 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500 μL/管 | -20℃ |

| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL/管 | -20℃ |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL/管 | -20℃ |

| 引物混合液 | 100 μL/管 | -20℃ |

| 荧光探针 | 50 μL/管 | 避光-20℃ |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL/管 | -20℃ |

| 说明书 | 1份 | — |

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输条件：低温干冰运输，避免反复冻融。

实验步骤

1. 标准曲线制备

标记6管稀释液（编号7至2），每管加入45 μL稀释液。

梯度稀释阳性对照（10⁸→10²拷贝/μL），每步震荡混匀，冰上保存。

2. 样品处理

核酸提取：使用兼容的RNA/DNA提取试剂盒，建议设置阳性（PC）和阴性对照（NC）。

3. PCR反应（20 μL体系）

| 组分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 样品模板/标准品 | 5 | — | 5（对应梯度） |

| 超纯水 | — | 5 | — |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，推算样品浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，扩增曲线明显。

阴性：Ct≥40。

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作分区进行（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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