驴源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

驴源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品原理

基于TaqMan探针技术，通过Taq DNA聚合酶的5'→3'外切酶活性，水解与靶序列结合的探针，释放5'端荧光报告基团（如FAM），与3'端淬灭基团分离后产生荧光信号。通过实时监测荧光强度变化，实现对驴源性成分的定量检测。

产品特点

高特异性：引物与探针针对驴源性成分高度保守区设计，避免与其他物种RNA交叉反应。

高灵敏度：检测下限可达10²拷贝/μL。

即开即用：预混优化试剂，用户仅需提供样品RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL无传染性DNA片段），便于区分假阴性。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分编号 | 成分名称 | 规格 | 包装颜色 |

| A | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 黄盖 |

| B | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 红盖 |

| C | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 黄盖 |

| D | 驴源性成分qRT-PCR引物混合液 | 100μL | 白盖 |

| E | 驴源性成分qRT-PCR探针 | 50μL | 棕色管 |

| F | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 黄盖 |

| G | 核酸稀释剂（试用装） | 1 mL | 绿盖 |

| H | 使用说明书 | 1份 | - |

实验步骤

1. 标准曲线制备（10²-10⁷拷贝/μL梯度稀释）

标记离心管（7-2号），每管加45μL稀释液。

7号管加入5μL阳性对照，震荡混匀得10⁷拷贝/μL标准品，依次稀释至10²拷贝/μL。

2. RNA样本制备

建议设置N+2个样本（含阴/阳性对照），使用兼容的RNA提取试剂纯化样本。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液（A） | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液（B） | 2 | 2 | 2 |

| 探针（E） | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液（D） | 2 | 2 | 2 |

| 样本RNA/标准品/水 | 5 | 5（水） | 5（标准品） |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |

| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量分析：以标准品Ct值的log值为横轴，拷贝数log值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性分析：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤35为有效实验。

注意事项

操作需在独立洁净区域进行，避免交叉污染。

探针避光保存，避免反复冻融。

废弃组分需按生物安全规范处理。

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