水牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 水牛源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Buffalo-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5339 |
检测原理
基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：
探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列特异性结合。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。
定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）与标准曲线比对，实现模板的绝对定量。
产品特点
高灵敏度：检测限低至10²拷贝/μL，适用于痕量水牛源性成分检测。
特异性强：引物/探针针对水牛保守序列设计，无交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供RNA模板。
内控设计：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），可区分假阴性。
适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系 |
| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq酶 |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释 |
| 水牛源性成分引物混合液 | 100μL | 特异性扩增 |
| 水牛源性成分探针 | 50μL | 荧光信号生成 |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作流程
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），独立操作避免污染。
2. RNA提取
使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样本，建议设置阴/阳性对照。
3. qRT-PCR反应
反应体系（20μL）：
缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物2μL + 模板RNA 5μL。
反应程序：
逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。
4. 数据分析
定量：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤35。
注意事项
分区操作：试剂配制、样本处理、PCR扩增需在独立区域进行。
避免反复冻融：试剂解冻后需混匀并短暂离心，剩余组分立即放回-20℃。
质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，确保结果可靠性。
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