马源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 马源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Horse-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5348 |
预期用途
本试剂盒基于TaqMan探针法，通过特异性引物和荧光探针检测食品、饲料或生物样本中的马源性成分DNA，适用于：
食品真伪鉴别：针对加工后感官难以识别的马源性成分。
过敏原监测：避免马源性致敏物质混入其他食品。
科研应用：仅限实验室研究，不可用于临床诊断。
技术原理
采用实时荧光定量PCR技术：
探针设计：针对马源性基因保守序列设计引物及探针，5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。
信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。
定量分析：通过Ct值与标准曲线比对，实现模板的定性与定量检测。
试剂盒组成
| 组分 | 规格（示例） | 功能说明 |
| 扩增反应液 | 975μL/管 | 含PCR缓冲液、dNTPs等 |
| 引物探针混合液 | 25μL/管 | 特异性引物及荧光探针 |
| 阳性质控品 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） | 验证实验有效性 |
| 阴性质控品 | 50μL | 排除污染或假阳性 |
| 荧光PCR稀释液 | 1mL | 标准曲线制备 |
操作步骤
1. 样本处理
DNA提取：推荐使用商品化核酸提取试剂盒，避免交叉污染。
保存要求：短期-20℃，长期-70℃（≤6个月），运输需2-8℃冰袋。
2. 试剂配制
反应体系（20μL/反应）：
反应液19.5μL + 扩增液0.5μL + 模板DNA 5μL。
标准曲线制备：将阳性对照10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL）。
3. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |
| | 60℃ | 1 min | （采集FAM通道信号） |
结果判读
阳性：Ct值≤30，且扩增曲线呈S型。
可疑：Ct值30-35，需重复检测。
阴性：Ct值≥40或无扩增。
定量分析：通过标准曲线计算模板拷贝数（R²≥0.98）。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行。
防污染措施：使用滤芯吸头，定期更换实验耗材。
质控要求：每批次实验需包含阴/阳性对照。
局限性：仅适用于DNA样本，RNA检测需额外反转录步骤。
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