象源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 象源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Elephant-derived Component Probe-based Real-time PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR5334 |
产品概述
本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专为检测象源性成分设计，适用于科研领域（非临床用途）。通过特异性引物和探针，结合实时荧光信号检测，实现对目标RNA/DNA的高灵敏度、高特异性定量分析。
产品组成
核心组分
探针法qRT-PCR缓冲液（500 μL）
探针法qRT-PCR酶混合液（100 μL）
荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）
象源性成分引物混合液（100 μL）
象源性成分qRT-PCR探针（50 μL）
阳性对照（1×10⁸拷贝/μL，50 μL）
辅助材料
说明书1份
需自备：样品RNA提取试剂（推荐兼容柱式提取试剂盒）。
技术原理
探针法设计：探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。PCR扩增时，Taq酶切割探针释放荧光信号，荧光强度与扩增产物量成正比。
定量分析：通过标准曲线（10²~10⁷拷贝/μL梯度稀释）计算待测样本浓度。
产品特点
即开即用：优化预混体系，仅需提供RNA模板。
高灵敏度与特异性：引物针对象源性成分保守区设计，避免交叉反应。
质控完善：含阳性对照，区分假阴性；阴性对照需Ct值≥40。
稳定性：-20℃保存，保质期12个月。
实验步骤
1. 标准曲线制备
按10倍梯度稀释阳性对照（10⁸拷贝/μL），获得6个浓度标准品（10²~10⁷拷贝/μL）。
2. RNA提取与质检
使用兼容试剂盒提取样本RNA，建议设置阴性/阳性对照（N+2个样本）。
3. PCR反应（20 μL体系）
| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |
| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 样本RNA/标准品/水 | 5 | -（加水5） | 5（对应标准品） |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 40循环 | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min（采集FAM通道信号） |
数据分析
定量：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，推算样本浓度。
定性：阴性对照无扩增（Ct≥40），阳性对照Ct值≤35。
注意事项
操作分区进行，避免气溶胶污染。
试剂保存于-20℃，避免反复冻融。
本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
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