3磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒

3磷酸甘油酸激酶(PGK)测试盒

产品简介：

3-磷酸甘油酸激酶（PGK）测试盒用于检测糖酵解途径中PGK酶的活性，该酶催化3-磷酸甘油酸与ATP反应生成

1,3-二磷酸甘油酸和ADP，是细胞能量代谢的关键环节。测试盒基于紫外分光光度法，通过测定340 nm处NAD

H的消耗量反映酶活性，适用于组织、细胞及微生物样本的定性或定量分析。PGK活性异常与疾病机制相关，如

代谢紊乱，因此在药物靶标设计和基础研究中具有重要价值。

测定意义

3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的关键酶，广泛存在于动植物和微生物体内，催化1，3-二磷酸甘油酸转变为3-磷酸甘油酸，产生1分子ATP，具有影响DNA复制和修补及刺激病毒RNA合成等生物学功能，广泛应用于药物靶标设计。

测定原理

3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP产生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脱氢酶和NADH作用下产生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm处的吸光度变化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。

试剂准备与工作液配制：

‌试剂复温‌：将试剂盒各组分从-20℃或4℃取出，室温（20–25℃）平衡30分钟。

‌溶液配制‌（以常见规格为例）：

‌试剂二‌：临用前加入2.5 mL蒸馏水溶解，分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

‌试剂三‌：加入1 mL蒸馏水溶解；

‌试剂四‌：加入1 mL蒸馏水溶解；

‌试剂五‌：加入4 mL蒸馏水溶解（棕色管中）；

‌工作液配制‌：

按照 ‌蒸馏水:试剂一:试剂二:试剂三:试剂四:试剂五 = 6:10:2:1:1:4‌ 的体积比充分混匀，现用现配。

测定步骤：

‌仪器准备‌：

开启紫外分光光度计或酶标仪，预热30分钟以上，设置波长为340 nm，反应温度为37℃（哺乳动物样本）或25℃（植物/微生物）。

‌加样与反应‌：

取适量工作液加入比色皿或96孔UV板中；

加入待测样本启动反应；

立即记录340 nm处吸光度随时间的变化（通常为2–5分钟内）。

‌空白对照设置‌：

使用不含样本的提取液作为空白管，用于扣除背景干扰。正常情况下ΔA空白应小于0.01。

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注意事项：

‌保持低温环境‌

所有样本（组织、细胞、血清等）在提取过程中必须全程置于冰上操作，防止酶活性降解。

‌避免反复冻融‌

样本提取后应立即测定或分装保存于-80℃，避免反复冻融导致酶失活。

‌合理控制样本量‌

组织样本建议取0.1g，按1:5～10（g:mL）比例加入提取液；

细胞样本建议5×10⁶个，超声破碎条件为冰浴、功率200–300W、超声3s/间隔10s、重复30次。

‌深色植物样本需脱色处理‌

若植物叶片色素含量高，初始吸光值过高（A₁ > 2），可加入少量活性炭处理5分钟，离心后取上清检测。