tNOS基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
试剂简介：
情况一：检测一氧化氮合成酶（NOS）活性/表达的试剂盒
如果你是进行细胞生物学或药理学研究，这通常是指利用PCR技术检测NOS基因的表达水平（mRNA），或者是一套包含荧光探针的酶活性检测试剂盒。
产品名称 | tNOS基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1619 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
1. 荧光定量 PCR (mRNA 表达检测)
如果目的是检测细胞中NOS基因（如iNOS, eNOS）的转录水平，试剂盒通常包含以下核心组分：
核心原理：TaqMan 荧光探针法。利用特异性引物扩增NOS基因片段，探针上带有荧光报告基团（FAM）和淬灭基团。PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性会切断探针，释放荧光信号。
试剂盒组成：
2× qPCR Mix：含dNTPs、Taq酶、Mg2、缓冲液。
特异性引物和探针混合液：针对目标NOS亚型（如iNOS、eNOS、nNOS）设计。
内参基因试剂（如GAPDH或β-actin）：用于数据标准化。
阳性对照：含NOS基因片段的质粒。
ROX Reference Dye（部分仪器需要）：校正孔间差异。
操作流程：
提取RNA：从细胞或组织中提取总RNA，并反转录为cDNA。
配制体系：在PCR管中加入Mix、引物探针、cDNA模板和水。
上机扩增：95℃预变性，然后进行40个左右的循环（95℃变性，60℃退火延伸）。
数据分析：通过Ct值计算NOS基因相对于内参基因的表达量变化（2^(-ΔΔCt)法）。
2. 荧光探针法酶活性检测试剂盒 (非PCR)
另一种可能是直接检测NOS酶活性的试剂盒（如DAF-FM DA法），虽然它不叫“PCR试剂盒”，但常被混淆：
原理：使用可穿透细胞膜的荧光探针DAF-FM DA。该探针本身无荧光，进入细胞后被酯酶水解，与NOS催化产生的NO结合后发出绿色荧光。
组分：NOS检测缓冲液、精氨酸（底物）、NADPH（辅因子）、DAF-FM DA探针。
操作：将探针加载到细胞中，在提供底物的条件下孵育，最后用荧光显微镜或酶标仪检测荧光强度（Ex/Em = 495/515 nm）。
情况二：特定病原体检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
如果你是在临床或兽医诊断背景下看到的这个名称，有可能是针对某种特定病毒（如之前的埃柯病毒或阿卡班病毒）的检测，但命名方式不规范。或者，它可能是指检测与NOS代谢相关的某种特定基因多态性。
对于通用的PCR-荧光探针法检测试剂盒，其通用操作逻辑如下：
1. 通用操作流程
样本处理：采集血液、组织或细胞样本，提取DNA或RNA（如果是RNA病毒，需进行逆转录）。
试剂配制：将PCR反应液、酶混合液、引物探针混合均匀，离心后分装到PCR管或8联管中。
加样：在每个反应管中加入处理好的样本DNA/RNA模板，以及阴性对照（无菌水）和阳性对照（标准品）。
PCR扩增：
预变性：95℃ 5分钟。
循环扩增：95℃ 15秒（变性）→ 60℃ 30-60秒（退火/延伸，采集荧光），重复40-45个循环。
结果判读：
阳性：扩增曲线呈典型的“S”型，Ct值 ≤ 35（或根据试剂盒说明书设定的阈值）。
阴性：无扩增曲线，或Ct值 > 40。
无效：如果阳性对照未扩增或阴性对照出现扩增，则实验失败，需重做。
2. 关键注意事项
防污染：这是PCR检测的生命线。必须严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），使用带滤芯的吸头，防止气溶胶污染导致假阳性。
对照设置：每次实验必须设置阳性对照和阴性对照，以监控试剂的有效性和环境的洁净度。
仪器校准：不同品牌的荧光PCR仪（如ABI 7500、Roche LightCycler、Bio-Rad CFX等）的光学参数可能不同，需根据说明书调整荧光通道（通常为FAM通道）。
公司正在出售的产品：
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关键字： tNOS基因;检测试剂盒;PCR-荧光探针法;
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