GUS基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
试剂简介：
1. 检测原理
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法（Real-time PCR）。
特异性扩增： 针对 GUS 基因（或包含 GUS 的特定载体序列）设计特异性引物和探针。
荧光检测： 在 PCR 扩增过程中，随着目的基因片段的扩增，荧光探针被切断，释放出荧光信号。
定量/定性分析： 仪器实时监测荧光信号的变化，通过扩增曲线和 Ct 值（循环阈值） 来判断样本中是否含有 GUS 基因，以及估算其拷贝数（相对或绝对定量）。
2. 检测目标与应用
目标基因： GUS（β-glucuronidase）基因。
应用领域：
转基因植物检测： 鉴定植物样本是否成功转化了 GUS 报告基因。
基因表达模式分析： 结合特定启动子，研究基因在植物组织中的时空表达模式。
实验室科研： 仅限用于科学研究，严禁用于临床诊断。
样本类型： 植物基因组 DNA、质粒 DNA、菌液等。
3. 试剂盒组成（典型配置）
根据主流科研试剂品牌（的配置，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 规格/含量 作用
PCR 反应液 (2×) 500 μL / 1 mL x 1管 含 dNTPs、Mg2、缓冲液等
DNA 聚合酶 (rTaq) 50 μL x 1管 热启动 Taq 酶
阳性对照 (PG) 50 μL x 1管 含 GUS 基因片段的质粒或菌液
阴性对照 (NG) 50 μL x 1管 无菌双蒸水
说明书 1 份 操作指南和参数说明
注：部分试剂盒可能包含 ROX 参比染料，具体视仪器型号而定。
4. 操作流程简述
样本处理： 提取植物组织或细胞的基因组 DNA，或制备菌液/质粒。
试剂配制（冰上操作）： 按照说明书比例（如 N+2 法，N 为样本数）混合 PCR 反应液和酶，分装到 PCR 管中。
加样： 向分装好的反应管中分别加入 5-10 μL 的模板 DNA（样本、阴性对照、阳性对照）。
上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序：
预变性： 95℃，10 分钟。
PCR 循环： 95℃ 15 sec → 60℃ 1 分钟（收集荧光），40 个循环。
结果判读标准：
阳性（+）：
扩增曲线呈典型的 S 型指数增长。
Ct 值 ≤ 36（或说明书设定的阈值）。
结论：样本中含有 GUS 基因。
阴性（-）：
无 Ct 值，或 Ct 值 > 40（或无扩增曲线）。
结论：样本中未检出 GUS 基因。
可疑（±）：
Ct 值在 36-40 之间。建议进行复检。
实验有效性：
阳性对照： 必须有明显扩增（Ct 值通常 < 30）。
阴性对照： 必须无扩增（无 Ct 值）。
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