Simply P 试剂盒采用改良硅胶膜吸附技术(离心柱法)。其核心原理是利用特殊的裂解液将细胞或组织裂解,释放出核酸。在特定的盐离子浓度和pH条件下,RNA能够选择性地结合在离心柱中的硅胶膜上,而蛋白质、多糖、脂质等杂质则被洗脱去除。最后,使用低盐浓度的洗脱缓冲液将纯净的RNA从膜上洗脱下来。
产品规格与储存
储存条件: 该试剂盒的一大特点是裂解液为中性,因此大部分组分可室温保存(15-25℃),有效期通常为2年。这避免了传统酸性裂解液(如Trizol)需要4℃保存且易变质的缺点。
适用样本: 可用于动物组织、植物组织、全血、体液、培养细胞、细菌、真菌以及石蜡包埋组织等多种样本类型。
3. 核心组分

试剂盒内通常包含以下关键组分(具体名称可能因版本略有差异):
裂解液(Lysis Buffer): 用于裂解细胞,释放RNA,并抑制RNase活性。
洗涤液(Wash Buffer): 用于去除杂质(如蛋白质、盐分、多糖多酚等)。注意:使用前通常需要按说明书加入指定量的无水乙醇。
洗脱液(Elution Buffer): RNase-Free水,用于溶解并洗脱纯化后的RNA。
离心吸附柱(Spin Column): 内含高分子膜材料,用于特异性吸附RNA。
收集管(Collection Tube): 配合离心柱使用,收集滤过液。
4. 产品特点与优势

速度快: 整个提取流程极简,最快可在 9分钟内 获得RNA,远快于传统的Trizol法(约30-60分钟)。
操作简便: 步骤少(通常仅需裂解、吸附、洗涤、洗脱4步),且试剂盒内试剂种类少,不易混淆。
安全性高: 裂解液为中性,无腐蚀性,不含苯酚、氯仿等有毒有机溶剂,对操作人员和环境更友好。
稳定性好: 由于裂解液不易变质,试剂盒在室温下也能保持稳定的性能,且提取结果不受操作者熟练程度影响较大。
高纯度: 提取的RNA纯度高,OD260/OD280比值通常在1.9-2.2之间,适用于下游各种高灵敏度实验。
5. 标准操作流程(简要)

样本裂解: 将组织或细胞加入裂解液中,充分匀浆或吹打混匀。
吸附: 将裂解液转移至离心吸附柱中,离心,使RNA结合在膜上。
洗涤: 加入洗涤液,离心弃废液,重复1-2次,以去除非特异性吸附的杂质。
洗脱: 将离心柱转移至新的RNase-Free离心管中,加入洗脱液,室温静置片刻后离心,即得纯化总RNA。
6. 下游应用

提取的总RNA可直接用于:
反转录PCR (RT-PCR)
实时荧光定量PCR (qPCR)
Northern Blot 杂交
cDNA 文库构建
高通量测序 (NGS) 等
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