pFMV35S基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
1. 检测原理：
该试剂盒基于 TaqMan 荧光探针法 的实时荧光定量 PCR（qPCR）技术。
靶标识别： 针对 FMV 35S 启动子的特异保守序列设计特异性引物和探针。
荧光信号： 反应体系中包含 FAM 荧光标记的探针。在 PCR 扩增过程中，随着目的基因片段的扩增，荧光探针被切断，释放出荧光信号。
实时监测： 仪器实时监测荧光信号的变化，通过扩增曲线和 Ct 值来判断样本中是否含有目标基因。
产品名称 | pFMV35S基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法） | 分类 | 荧光PCR |
货号 | XG-P1630 | 用途 | 仅供科研研究实验 |
2. 检测目标与应用
目标基因： pFMV35S（玄参花叶病毒 35S 启动子）。
应用领域：
转基因筛查： 用于食品、饲料、农产品及其加工品中转基因成分的定性检测。
科研用途： 用于分子生物学研究中，检测构建的载体或转基因植株中是否含有该启动子元件。
特异性： 该试剂盒通常能特异性区分 FMV 35S 与同源性较高的 CaMV 35S（花椰菜花叶病毒 35S 启动子）。
3. 试剂盒组成（典型配置）
组分名称 规格/含量 作用
A-pFMV35S-1 (反应液) 1200μL × 1支 含 dNTPs、缓冲液、Mg2等
B-I (酶混合液) 55μL × 1支 含 HotStart Taq 酶、逆转录酶（如适用）、UNG酶
C-I (显色液/探针) 1200μL × 1支 含特异性引物和 FAM 标记的探针
PG-pFMV35S-I (阳性对照) 50μL × 1支 含目标片段的质粒或标准品，用于验证实验
NG-pFMV35S-I (阴性对照) 50μL × 1支 无菌水，用于监控污染
注：部分厂家可能将酶和反应液预混，具体以说明书为准。
4. 操作流程简述
样本制备： 提取待测样品的基因组 DNA（建议使用配套的植物基因组 DNA 提取试剂盒）。
试剂配制（冰上操作）： 按照说明书比例（如 N+2 法，N 为样本数，+1 阴性对照，+1 阳性对照）混合 A、B、C 液，分装到 PCR 管中。
加样： 向分装好的反应管中分别加入 2-5μL 的模板 DNA（样本、阴性对照、阳性对照）。
上机扩增： 将 PCR 管放入荧光定量 PCR 仪中。
5. 反应程序与结果判读
推荐反应程序：
预变性： 95℃ 10 min（或按说明书设置）。
PCR 循环： 95℃ 15 sec → 60℃ (或 63℃) 45 sec（收集荧光），40-45 个循环。
结果判读标准：
阳性（+）：
扩增曲线呈典型的 S 型。
Ct 值 ≤ 36（或说明书设定的阈值）。
结论：样品中含有 pFMV35S 基因。
阴性（-）：
无 Ct 值，或 Ct 值 > 36（或无扩增曲线）。
结论：样品中不含有 pFMV35S 基因或含量低于检测限。
实验有效性：
阳性对照（PG）： 必须有明显扩增（Ct 值在预期范围内）。
阴性对照（NG）： 必须无扩增（无 Ct 值）。
若对照不符合要求，本次实验视为无效。
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