该试剂盒基于 LAMP（环介导等温扩增） 技术。
核心机制：利用 4-6 条特异性引物识别靶序列的 6-8 个位点，在 60℃-65℃ 的恒定温度下，利用链置换聚合酶（Bst DNA Polymerase）对 DNA 进行指数级扩增。
结果判读：反应过程中，随着 DNA 的大量合成，反应液中的荧光染料（如 SYTO-9 或钙黄绿素）会嵌入 DNA 双链发出荧光。仪器实时监测荧光信号变化，自动生成扩增曲线。
优势：相比传统的 PCR 法，恒温法不需要复杂的热循环仪，反应速度快（通常 60 分钟 内完成），且灵敏度极高。
2. 试剂盒组成 (以 48 测试/盒为例)
根据常见的产品说明书，试剂盒通常包含以下组分：
组分名称 描述 保存条件
A 液 (反应液) 含引物、dNTPs、缓冲液、荧光染料 -20℃ 避光保存
B 液 (酶液) Bst DNA 聚合酶 -20℃ 保存
阴性对照 (NG) 无菌水 -20℃ 或 4℃ 保存
阳性对照 (PG) 含 CaMV35S 基因片段的质粒 -20℃ 保存
3. 适用范围与性能
应用领域：食品中转基因成分检测、饲料安全检测、进出口检验检疫、科研实验。
检测样本：大豆、玉米、油菜籽及其加工制品（如食用油、蛋白粉）、植物叶片等。
检出限：灵敏度通常可达 0.1%，即能检测出混合样品中仅含 0.1% 的转基因成分。
特异性：特异性扩增 CaMV35S 基因片段，与其他非转基因植物基因组无交叉反应。
4. 操作流程详解
样本前处理：
取少量样品（约 100mg），使用植物基因组 DNA 提取试剂盒提取总 DNA（或使用配套的粗提液进行快速裂解）。
体系配置（冰上操作）：
计算用量：若待检样本数为 N，则按 N+2（1 个阴性对照 + 1 个阳性对照）计算试剂用量。
配制混合液：将 A 液（反应液）和 B 液（酶液）按说明书比例混合，涡旋振荡混匀，瞬时离心。
分装：将混合液分装至 PCR 管中（通常每管 23μL）。
加样：
向对应 PCR 管中加入 2μL 模板 DNA（或阴性/阳性对照）。
盖紧管盖，涡旋混匀，瞬时离心。
恒温扩增：
将 PCR 管放入恒温荧光检测仪（如 Genie II, Dhelix 系列等）。
设置反应温度为 63℃（具体视说明书而定），反应时间 60 分钟，每 1 分钟采集一次荧光信号。
结果判读：
阳性（+）：仪器屏幕上显示典型的“S”型扩增曲线，且 Tt 值（或 Ct 值）≤ 45。
阴性（-）：无扩增曲线，荧光信号呈直线或轻微波动，无特征性扩增峰。
5. 关键注意事项
严格防污染：
LAMP 扩增效率极高，产物极易造成气溶胶污染。严禁在扩增区打开扩增后的 PCR 管盖。
实验室必须严格分区（试剂准备区、样本制备区、扩增区），移液器、枪头、离心管等耗材严禁混用。
避光操作：反应液中的荧光染料对光敏感，试剂配制和加样过程应尽量避光。
避免反复冻融：酶液和反应液应按单次使用量分装保存，避免反复冻融超过 3 次，以免酶活性下降。
离心步骤：试剂解冻后及加样前，必须进行瞬时离心（约 30 秒），防止液体挂壁导致反应体系浓度不准。
总结
该试剂盒是转基因检测中快速筛查 CaMV35S 启动子的有效工具。如果你是检测机构人员，建议在操作时严格遵守“单向流动”原则（从试剂准备到扩增，不逆行），以确保结果的准确性。
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