人胆囊癌细胞+LUC;GBC-SD+LUC
商品属性
产品名称 | 人胆囊癌细胞+LUC;GBC-SD+LUC | 英文名称 | LUCGBC-SD+LUC |
规格 | 1×106 | 细胞形态 | 贴壁生长 |
货号 | P-X10769 | 细胞生长 | 上皮细胞样 |
来源:61岁男性低分化胆囊癌患者组织(王展明等,2000年建立)
细胞形态:上皮细胞样,贴壁生长,呈多边形、纺锤形或正方形
STR鉴定:已通过STR检测(GBC-SD)
支原体检测:阴性
生物学特性
标志物分泌:CEA、CA19-9
倍增时间:约21.4小时
致瘤性:可在裸鼠中成瘤,且与原发肿瘤相似
荧光特性:通过慢病毒转染携带Luc基因,但随传代次数增加荧光强度可能减弱,建议使用嘌呤霉素维持筛选压力
培养条件
培养基:RPMI 1640(含2mM L-谷氨酰胺)+ 10%胎牛血清
培养环境:37℃、5% CO₂
传代方法:常规胰酶消化,建议传代比例1:2至1:3
实验操作指南
1. 细胞复苏
快速解冻:将冻存管从液氮或-80℃冰箱取出,迅速放入 37℃ 水浴锅中,轻轻摇晃,使冻存液在 1-2 分钟内完全融化(注意不要让水没过管口)。
转移:用 75% 酒精擦拭管口,将细胞悬液转移至含有 5-10 mL 预热完全培养基的离心管中(稀释 DMSO)。
离心:1000 rpm (约 150-200g) 离心 3-5 分钟。
重悬:弃去上清液,加入新鲜完全培养基重悬细胞,接种于 T25 培养瓶中。
培养:放入 37℃、5% CO₂ 培养箱中培养。次日更换培养基,以去除死细胞和残留的 DMSO。
2. 细胞传代 (当细胞融合度达 80%-90% 时)
吸液:吸去旧的培养基。
洗涤:加入适量 PBS 缓冲液轻轻润洗细胞 1 次(去除残留血清,利于胰酶发挥作用)。
消化:加入 0.25% 胰蛋白酶 (Trypsin-EDTA) 约 1-2 mL (以覆盖瓶底为宜),放入 37℃ 培养箱消化 1-2 分钟。
观察:显微镜下观察,待细胞变圆、间隙变大或开始脱落时,立即进行下一步。
终止:加入含血清的完全培养基终止消化(血清能抑制胰酶活性)。
吹打:轻轻吹打细胞层,使细胞完全脱落并吹散成单细胞悬液。
离心:1000 rpm 离心 3-5 分钟。
分瓶:弃上清,加入新鲜培养基重悬,按 1:2 或 1:3 的比例接种到新的培养
注意事项
生物安全:需在二级生物安全柜内操作,废液及接触器材需高压灭菌处理
细胞稳定性:建议收到细胞后传代3次以上再冻存备份,并进行荧光筛选
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