线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)测定试剂盒/微量法/96样

线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

ICDHm（EC 1.1.1.41 ）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，在三羧酸循中催化异柠檬酸生成 α-酮戊二酸，同时将 NAD+   还原为 NADH，是三羧酸循环的限速酶之一，其催化的反应是细胞 NADH主要来源之一。

测定原理：

ICDHm 催化 NAD+  还原生成 NADH ，导致 340nm 处光吸收上升。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)在试剂五中加入 18mL 试剂四充分溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

(2)在试剂六中加入 1mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂六和 180μL 试剂五，混匀，立即记录340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。