丙酮酸脱氢酶(PDH)测定试剂盒/微量法/96样

丙酮酸脱氢酶(PDH)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

PDH（EC 1.2.4.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是丙酮酸脱氢酶复合体(PDHC)催化丙酮酸氧化脱羧的限速酶，催化丙酮酸脱梭生成羟乙基-TPP，把糖酵解和三羧酸循环连接起来。

测定原理：

PDH 催化丙酮酸脱氢，同时还原 2,6-二氯酚靛酚（2,6-DCPIP），从而导致 600nm 光吸收的减少。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏。

测定步骤：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 605nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

(1) 在试剂五中加入 19mL 试剂四充分溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 10min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融；

(2) 在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 试剂五，混匀，立即记录 605nm 处初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。