3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
GAPDH 催化 3-磷酸甘油醛氧化生成 1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理:
3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和 ATP 生成 1,3 二磷酸甘油酸。GAPDH 逆向催化 1,3 二磷酸甘油酸和NADH 生成 3 磷酸甘油醛、无机磷和 NAD ,340nm 处测定 NADH 的减少量可反映 GADPH 活性的高低。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
测定操作:
1、分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、样本测定
(1) 工作液的配制:将试剂二全部倒入试剂一瓶中,充分溶解,37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10分钟;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2) 在试剂三中加入 1mL 蒸馏水,充分混匀待用;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(3) 在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 样本、20μL 试剂三和950μL 工作液,混匀,加入最后一个试剂的同时开始计时,记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值 A2 ,计算 ΔA=A1-A2。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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