胃蛋白酶(Pepsin)测定试剂盒/微量法/48S
测定意义:
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
测定原理:
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物与福林试剂反应后显蓝色;一定范围内,其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。
自备仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。
测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min ,调节波长到 580 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂三和试剂四置于 37℃水浴预热30min。
3. 标准管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 20μL 标准品,40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min ,于 580 nm 测光吸收,记为 A 标准管。
4. 空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 20μL 蒸馏水,40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 标准空白管。
5. 对照管:取 EP 管,加入 100 μL 蒸馏水,置于 37℃水浴保温 10min;加入 100μL 试剂四,盖紧后摇匀 1min;加入 20μL 粗酶液,混匀后 8000g 4℃离心 10 分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20 μL ,再加入 40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min ,于 580 nm 测光吸收,记为 A 空白管。
6. 测定管:取 EP 管,加入 20μL 粗酶液,100μL 试剂三,置于 37℃水浴保温 10min;加入 100μL 试剂四,盖紧后摇匀 1min;8000g 4℃离心 10 分钟取上清;在微量玻璃比色皿/96 孔板加入上清液 20 μL ,再加入 40μL 试剂二,120μL 试剂五,20μL 试剂六,混匀后室温静置 20min,于 580 nm 测光吸收,记为 A 测定管。
注 意:
空白管和标准管只需要测定一次。
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