中性蛋白酶(NP)测定试剂盒/微量法/48S
测定意义：
NP 在一定的温度和中性 pH 条件下，催化水解蛋白质。由于其安全无毒、水解能力强、作用范围广等特点，中性蛋白酶常用于食品、饲料、化妆品和营养保健品生产。
测定原理：
中性条件下，NP 催化酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在 680nm有特征吸收峰。
自备仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1.5 mL EP 管和蒸馏水。
测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min ，调节波长到 680 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂二、试剂三和试剂四置于 30℃水浴保温30min。
3. 对照管：取 0.5 mL EP 管，加入 20μL 粗酶液，40μL 试剂二，混匀后置于 30℃水浴保温 10min；加入 40μL试剂三，混匀后 8000g ，4℃离心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 试剂四，40μL试剂五，混匀后置于 30℃水浴保温20min ，取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 680nm 测定光吸收，记为 A 对照管。
4. 测定管：取 0.5 mL EP 管，加入 20μL 粗酶液，40μL 试剂三，混匀后置于 30℃水浴保温 10min；加入 40μL试剂二，混匀后 8000g ， 4℃离心 10min；取 40μL 上清液，加入新的 EP 管，再加入 200μL 试剂四，40μL试剂五，混匀后置于 30℃水浴保温20min ，取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 680nm 测定光吸收，记为 A 测定管。（注意与空白管不同，先加试剂三，后加试剂二）
5. 空白管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 蒸馏水，200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于 30℃水浴保温20min ，取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 680nm 测定光吸收，记为 A 空白管。
6. 标准管：取 0.5 mL EP 管，加入 40μL 标准品，200μL 试剂四，40μL 试剂五，混匀后置于 30℃水浴保温20min ，取 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 680nm 测定光吸收，记为 A 标准管。
注 意：
空白管和标准管只需要测定一次。
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