丙酮酸磷酸双激酶(PPDK)测定试剂盒/微量法/96样
测定意义:
丙酮酸磷酸双激酶(pyruvate phosphate dikinase, PPDK, EC 2.7.9.1 )是 C4 途径和景天科酸代谢途径的限速酶,催化 ATP、丙酮酸和 Pi 经三步反应生成磷酸烯醇式丙酮酸。该酶主要存在于 C4 植物的叶绿体基质中,对光合功能具有重要调节作用。
测定原理:
PPDK 的逆向反应催化磷酸烯醇式丙酮酸、AMP 和 PPi 生成丙酮酸、ATP 和 Pi ,乳酸脱氢酶进一步催化丙酮酸和 NADH 生成乳酸和 NAD+ ,在 340nm 测定 NADH 减少速率,计算 PPDK 活性。
自备仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。
测定步骤和加样表:
1 、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2 、 样本测定
(1)工作液的配制:临用前取试剂二一瓶加入 10mL 试剂一和 5μL 试剂三,充分混匀,置于 37℃水浴5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液,混匀,立即记录 340nm 处初始吸光值 A1 和 37℃反应 5min 后的吸光值 A2 ,计算 ΔA=A1-A2。
注 意:
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
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