二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测定试剂盒/分光光度法/24样 新品

二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测定试剂盒/分光光度法/24样

测定意义：

二磷酸核酮糖羧化酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO2 的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

测定原理：

（1）在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1 ，5-二磷酸（RuBP）与 1 分子的 CO2 结合，产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸（PGA）；（2）PGA 可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，伴随着 NADH 氧化生成 NAD+ ；（3）在 340 nm NADH 有特征吸收峰，而 NAD+没有此吸收峰，因此测定 340nm 吸光度下降速率可以代表 Rubisco 的羧化酶活性。

自备仪器和用品：

可见-紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：

1 、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 样本测定

（1） 工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三 1 ：1 混合，用多少配多少；

（2） 在 1mL 石英比色皿中加入 50uL 样本、50uL 试剂四和 900uL 工作液，混匀，立即记录 340nm 处 20s时吸光值 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。