二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测定试剂盒/微量法/96样 新品

二磷酸核酮糖羧化酶(Rubisco)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

二磷酸核酮糖羧化酶（EC 4.1.1.39）是植物光合作用中的一个关键酶，既控制着CO2 的固定，同时又制约着碳素向Calvin循环和光呼吸循环分流，其活性的大小直接影响着光合速率。

测定原理：

在 Rubisco 的催化下，1 分子的核酮糖-1 ，5-二磷酸（RuBP）与 1 分子的 CO2 结合，产生 2 分子的 3-磷酸甘油酸（PGA），PGA 可通过外加的3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用，产生甘油醛-3-磷酸，并使还原型辅酶 I（NADH）氧化。因此，340nm 吸光度的变化可计算还原型辅酶 I 氧化速率，还原型辅酶I 氧化速率可反应 Rubisco 的活性。

自备仪器和用品：

分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：

1 、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

（1）工作液的配制：临用前将试剂二和试剂三 1 ：1 混合，用多少配多少；

（2）在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10uL 样本、10uL 试剂四和 180uL 工作液，混匀，立即记录340nm 处 20s 时吸光值 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A1-A2。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。