人肺微血管内皮细胞；HULEC-5a

人肺微血管内皮细胞；HULEC-5a

商品属性

别名 Human Lung Microvascular Endothelial Cell line-5a

组织来源 人肺组织（新生个体来源）

细胞形态 上皮细胞样（铺路石状）

生长特性 贴壁生长

生物安全等级 2

主要应用 肺血管屏障研究、急性肺损伤机制、炎症反应、血管生成

生长培养基：MCDB131基础培养基（不含L-谷氨酰胺），补充10ng/ml EGF、1μg/ml氢化可的松、10mM谷氨酰胺、10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素-链霉素（P/S）。

培养条件：

气相环境：95%空气，5% CO₂；

温度：37℃恒温；

湿度：70%-80%。

细胞培养操作指南

细胞复苏

步骤：

从液氮中取出冻存管，立即置于37℃水浴中快速解冻（约1-1.5分钟）。

将细胞悬液转移至含10ml培养基的离心管中，1000rpm离心4-5分钟，弃上清。

用1ml新鲜培养基重悬细胞，接种至培养皿（含8-10ml培养基），轻摇均匀后置于培养箱。

24小时后更换培养基，后续每2-3天换液一次。

细胞传代

时机：细胞融合度达80%-90%时进行。

步骤：

弃旧培养基，用PBS（无Ca²⁺/Mg²⁺）洗涤细胞1-2次。

加入0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液（覆盖细胞层），37℃消化1-2分钟（显微镜下观察细胞变圆后终止）。

加入等体积含血清培养基终止消化，吹打制成单细胞悬液。

离心（1000rpm，4分钟）后按1:2至1:5比例分瓶传代。

细胞冻存

冻存液配方：70%完全培养基 + 20% FBS + 10% DMSO（现配现用）。

步骤：

消化离心后细胞用冻存液重悬，分装至冻存管（1×10⁶ cells/管）。

梯度降温：4℃ 30分钟 → -20℃ 30分钟 → -80℃过夜，最终转移至液氮长期保存。

注意事项

无菌操作：全程在超净工作台中进行，避免污染。

质量控制：建议定期进行STR鉴定以确保细胞株真实性。

培养基更换：换液时需轻柔操作，避免损伤贴壁细胞。
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