结合态淀粉合成酶(GBSS)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
GBSS(EC 2.4.1.21 )以束缚态存在于淀粉体中,催化淀粉链的加长反应,主要负责直链淀粉的合成。
测定原理:
GBSS 催化 ADPG 与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成 ADP;进一步通过反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH ,其中NADPH 生成量与前一步反应生成的 ADP 数量呈正比,通过 340nm 下测定 NADPH 的增加量,可以计算GBSS 活性。
需自备的的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤:在 EP 管中按顺序加入下列试剂
试剂名称(μL)
测定管
样本
150
试剂二
270
混匀,30℃保温 20 min ,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却
试剂三
混匀,30℃保温 30 min ,置沸水浴中 1 min(盖紧,防止水分散失),冰浴冷却,10000g 4℃离心 10min,取上清液(如果一次性测定样本较多,可将试剂四、五和六按比例配成混合液)
上清液
450
试剂四
300
试剂五
15
试剂六
混匀后立即 340 nm 波长下记录初始吸光度 A1 和 2min 后的吸光度 A2 ,计算 ΔA=A2-A1。
注 意:
试剂二如有沉淀,加入之前要使之充分溶解混匀。
上海酶联生物科技有限公司
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