果糖-6-磷酸果糖激酶(PFK)测定试剂盒/分光光度法/48样
测定意义:
PFK(EC 2.7.1.11 )广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,负责将果糖-6-磷酸和 ATP 转化为果糖-1,6 二磷酸和 ADP,是糖酵解过程的关键调节酶之一。
测定原理:
PFK 催化果糖-6-磷酸和 ATP 生成果糖-1,6-二磷酸和 ADP ,丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH 氧化生成 NAD+ ,在 340nm 下测定 NADH 下降速率,即可反映 PFK 活性。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。测定步骤和加样表:
加样表
试剂名称(μL)
测定管
工作液
800
样本
30
试剂三
5
试剂四
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,立即混匀,加试剂四的同时开始计时,记录在 340 nm波长下20 秒时的初始吸光度 A1 和 10 分 20 秒时的吸光度 A2 ,计算 ΔA=A1-A2。
不同匀浆组织中 PFK 活力不一样,做正式试验之前请做 1-2 只预试,若 ΔA>0.5,则说明活力太高,必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液(计算公式中乘以相应稀释倍数),或缩短反应时间至 2min 或 5min ,使 ΔA<0.5,以提高检测灵敏度。
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