间隔臂设计:16 原子间隔臂(由氨基己酸和氨基丁酸组成)避免生物素与 RNA 聚合酶或靶标分子的空间冲突,掺入效率可达天然 UTP 的 80%-90%;
酶促兼容性:可被 T7、T3、SP6 等噬菌体 RNA 聚合酶及真核 RNA 聚合酶高效识别,掺入比例建议为反应体系中 UTP 总量的 20%-50%,平衡标记效率与 RNA 产量;
稳定性:生物素与 UTP 的共价键在常规实验条件(pH 7.0-8.5,37℃)下稳定,标记的 RNA 探针在 - 80℃可保存 6 个月以上,反复冻融不影响生物素活性。
产品关键指标:纯度≥95%(HPLC 检测),无核酸酶污染,pH 值 7.5(Tris-HCl 缓冲),外观为无菌透明水溶液,避免强光照射。
信号放大效应:单个生物素可结合 4 个链霉亲和素分子,通过多级放大(如链霉亲和素 - 辣根过氧化物酶 - 底物系统)实现皮克级 RNA 检测,灵敏度显著高于直接荧光标记;
低背景干扰:生物素与核酸无特异性结合,链霉亲和素对 DNA/RNA 的非特异性吸附低,实验信噪比高,适合复杂样本(如组织匀浆、细胞裂解液)分析;
多技术兼容性:可与荧光、化学发光、比色等检测系统联用,适配共聚焦显微镜、流式细胞仪、酶标仪等多种设备,支持多重标记实验(如与 Cy3/Cy5 荧光探针联合使用)。
体外转录优化:模板需含 T7/T3/SP6 启动子,推荐使用线性化质粒或 PCR 产物(避免环状模板导致的转录提前终止);反应体系中加入 RNase 抑制剂(如 RNasin)和适量 DTT(10mM),37℃孵育 1-4 小时,通过琼脂糖凝胶电泳验证 RNA 完整性。
掺入比例控制:Biotin-16-UTP 与天然 UTP 的比例建议为 1:1 至 1:4,过高比例可能降低转录效率,过低则标记密度不足;例如,20μL 反应体系中加入 2μL 10mM Biotin-16-UTP 和 6μL 10mM UTP,标记效率最佳。
标记后处理:转录产物经 DNase I 消化模板 DNA,通过酚 - 氯仿抽提或 RNA 纯化柱去除游离核苷酸,避免残留 Biotin-16-UTP 干扰后续亲和反应。
储存与安全:产品需避光保存于 - 20℃,避免反复冻融(建议分装为 10-20μL / 管);操作时佩戴手套和口罩,避免皮肤接触和吸入,实验废弃物按生物安全规范处理。
癌症研究:标记 lncRNA HOTAIR 探针用于 FISH 实验,定位其在乳腺癌细胞中的亚细胞分布,揭示其与肿瘤侵袭转移的相关性,为预后评估提供分子标志物;
神经科学:标记神经元特异性 mRNA 探针,通过原位杂交观察小鼠大脑发育过程中基因表达的时空变化,阐明神经分化的分子机制;
病毒诊断:制备 SARS-CoV-2 的 N 基因生物素化 RNA 探针,结合 RT-PCR 和链霉亲和素磁珠富集,实现临床样本中病毒 RNA 的超灵敏检测,检测限低至 10 拷贝 /μL。
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