总脂酶[脂蛋白脂酶(LPL)肝脂酶(HL)]测定试剂盒/比色法/48样测定意义:脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase LPL)存在肝外组织毛细血管内皮细胞表面,它主要催化血浆中乳糜微粒(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯(TG)水解,在乳糜微粒(CM)及极低密度脂蛋白(VLDL)的降解中发挥重要作用。肝脂酶(Hepatic Lipase HL)则仅存在肝内皮细胞表面,它主要在中密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)代谢中起重要作用。
试剂盒的组成和配制:
组份
50 管/24 样
100 管/48 样
保存
试剂一
粉剂
粉剂×2 支
粉剂×4 支
4℃保存 3 个月
溶剂
5ml×1 瓶
10ml×1 瓶
试剂一的配制:用时每支粉剂加溶剂 1.5ml,充分混匀,4℃冰箱保存。
试剂二
溶液
6ml×1 瓶
6ml×2 瓶
试剂三
试剂四
甲液
0.5ml×1 支
乙液
30ml×1 瓶
60ml×1 瓶
试剂四底物应用液的配制:按甲液 ∶ 乙液=1∶200的比例进行配制,需多少配多少。配好后37℃水浴预温 10 分钟以上。
试剂五
4ml×1 瓶
4ml×2 瓶
丙液
30ml×2 瓶
铜试剂配制:按甲液 ∶ 乙液 ∶丙液=2∶1∶17 的比例进行配制,配好的铜试剂为澄清液体,需多少配多少(用不完的不可以和新配的铜试剂混合,否则会对结果有影响。),用之前 37℃ 水
浴预温 10 分钟以上.请严格按照甲、乙、丙顺序配制铜试剂,每加完一样试剂请混匀。
试剂六
氯仿(分析纯)自备
试剂七
甲粉
甲粉×2 支
甲粉×3 支
10ml×2 瓶
10ml×3 瓶
显色剂的配制:用时将一支甲粉加一支乙液 10ml 充分溶解,并且一定要在临用前 1~2 分钟按 100∶1 的比例加入丙液,混匀后立即使用,用多少配多少* ,用不完的显色剂不可以再用。
甲乙混合液可以-20℃保存。
试剂八
标准品
粉剂×3 支
2mmol/L 棕榈酸标贮液的配制:取标准品粉剂 1 支加溶剂溶解并定容至 10ml,一定要充分混匀。
500μmol/L 棕榈酸标准品的配制:取 2mmol/L 棕榈酸标贮液用溶剂 4 倍稀释,即 2mmol/L 棕榈酸标准品 ∶溶剂=1∶3 稀释。
操作步骤:
1、样本的前处理:
①、称取组织的重量,按重量(g):体积(ml)=1:9 的比例,加入 9 倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,制成 10%组织匀浆,2500 转/分,离心 10 分钟,取上清液待测
②、血清(浆)样本直接取样进行测定。2、组织的计算与举例:
①﹑定义:
每毫克组织蛋白每小时在反应系统中所产生的 1 微摩尔(µmol)的游离脂肪酸 FFA 为 1 个酶活性单位(FFAµmol/mgprot•小时)
测试原理:
脂蛋白脂酶(LPL) 和肝脂酶(HL) 可分解甘油三酯(TG) 并水解为甘油及游离脂肪酸(FFA),用铜试剂测定生成的游离脂肪酸(FFA)的量即可分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。
肝脂酶为糖蛋白,其活性不需要载脂蛋白(apolipoprotin)CⅡ激活及一些离子的激活,不受高浓度盐及鱼精蛋白的抑制,利用此特点即可分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。
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