大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA试剂盒

本试剂盒以双抗体夹心ELISA技术为核心检测原理，在酶标板微孔内包被纯化的大鼠LPL特异性抗体。检测孵育阶段，待测样本和标准品中的大鼠LPL抗原可特异性吸附于固相抗体上，洗板去除未结合的杂质蛋白与液体后，加入辣根过氧化物酶标记的LPL检测抗体，完成特异性二次结合。经底物TMB显色、终止液终止反应后，微孔内溶液吸光度值与样本中LPL含量呈正相关，通过检测吸光度并拟合标准曲线，可精准定量大鼠样本中脂蛋白脂酶的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测浓度≤0.2ng/mL

检测范围：0.5ng/mL - 100ng/mL

反应时间：总反应130分钟（样本孵育70min、酶孵育30min、显色30min）

保存条件：2-8℃避光保存，禁止冷冻，开封试剂1个月内用完

有效期：12个月

检测波长：450nm

标准曲线绘制：以标准品浓度梯度对应OD值拟合标准曲线，R²≥0.991

注意事项：样本采集后需快速分离上清，避免酶活性降解，实验全程避免高温环境
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂盒全部试剂室温平衡 28min，配制洗涤工作液，待测组织匀浆上清 12000rpm 离心 10min 取上清备用，酶标板拆取所需条数。

2. 标准品孔依次加入梯度标准品 50μL，样本孔加入 50μL 上清待测液，空白孔添加稀释缓冲液 50μL。

3. 各孔加入酶结合抗体工作液 100μL，封板膜密封，37℃恒温孵育 65min，中途无需开盖。

4. 移除封板膜，倾倒废液，洗涤液加满每孔，浸泡 30s 甩干，重复洗板 5 次，板孔倒置拍干水分。

5. 避光添加显色底物 A、B 各 50μL，轻微震荡，37℃避光显色 16min。

6. 加入终止液 50μL / 孔，混匀终止反应。

7. 酶标仪 450nm 读数，绘制标准曲线计算脂蛋白脂酶含量。