产品基本信息

规格:50T/盒
检测方法:染料法荧光定量PCR(SYBR Green等非特异性染料)
适用样本:人源性DNA模板
储存条件:-20℃避光保存,有效期12个月。
产品名称 | 人X染色体染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Human X Chromosome Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR2701 |

试剂盒组分

预混液:含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料(Cat#N132034,支持No/Low/High Rox校正)。
阳性对照:人X染色体特异性DNA片段(10^8拷贝/μL,需按10倍梯度稀释使用)。
模板稀释液:用于标准曲线制备或样本稀释。
RNase-free超纯水:用于体系配置或模板稀释。
实验前准备

设备与耗材:
qPCR仪(兼容染料法检测通道)、移液器、冰盒、RNase-free八连排管/96孔板、离心机。
试剂处理:
预混液需从-20℃取出后置于冰上缓慢解冻(5-10分钟),轻颠倒混匀,避免涡旋或产生气泡。
阳性对照稀释需在独立区域进行,使用带滤芯枪头防止污染(梯度稀释方法见下文)。
标准曲线制备(以10^2-10^7拷贝/μL为例)
标记6管,分别加入45 μL稀释液。
取5 μL阳性原液(10^8拷贝/μL)加入第一管,震荡混匀得10^7拷贝/μL,依次稀释至10^2拷贝/μL。
反应体系配置(20 μL体系示例)
| 组分 | 体积(μL) |
| 预混液 | 10 |
| 引物(10 μM) | 0.8(终浓度400 nM) |
| 模板DNA | 2 |
| RNase-free水 | 补至20 |
PCR程序设置
预变性:95℃ 3分钟。
循环阶段(40 cycles):
95℃ 10秒(变性)
60℃ 30秒(退火/延伸,采集荧光信号)。
熔解曲线分析(可选):60-95℃,每0.5℃递增,验证产物特异性。
质量控制
阴性对照(NTC):以水替代模板,监测污染。
内参基因:推荐GAPDH或β-actin,用于数据归一化。
技术重复:建议3复孔,确保数据可靠性。
注意事项

操作全程需RNase-free环境,避免反复冻融试剂。
熔解曲线出现多峰提示非特异性扩增,需优化引物或退火温度。
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关键字: 人X染色体;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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