禽轮状病毒A组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称
英文名称
Avian Rotavirus Group A Dye-based Quantitative Real-time RT-PCR Kit
规格
50T
货号
PR2690
产品概述
本试剂盒采用一管式荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物和染料法检测体系，实现对禽轮状病毒A组RNA的定性或定量检测。适用于科研用途（如病毒溯源、流行病学研究），不可用于临床诊断。
试剂盒组成
RT-PCR反应液：包含逆转录酶、DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系。
荧光染料：如SYBR Green等，需避光保存。
阳性对照：非活体DNA片段（10E2-10E7拷贝/μL梯度稀释标准品），需独立操作以避免污染。
模板稀释液：用于标准品稀释及样本预处理。
ROX校正染料（可选）：根据机型需求添加。
操作步骤
1. 样本处理
提取待测样本RNA，建议使用商品化RNA提取试剂盒。
2. 阳性对照稀释（示例：6个梯度）
标记离心管（7至2号），每管加入45μL模板稀释液。
按10倍梯度稀释阳性对照，避免交叉污染。
3. PCR反应体系配制（20μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| RT-PCR反应液 | 10 |
| 荧光染料 | 0.5 |
| 引物混合液 | 2 |
| RNA模板 | 2 |
| RNase-free水 | 补至20 |
4. 上机程序
逆转录：50℃ 15分钟（可选，根据病毒RNA特性调整）。
预变性：95℃ 2分钟。
循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号），共40循环。
注意事项
操作需在无菌环境下进行，分区处理样本、试剂及耗材。
标准品稀释需使用带滤芯枪头，防止气溶胶污染。
反应体系需避光配制，避免荧光淬灭。
不同机型可能需调整ROX添加量，具体参考仪器说明书。
结果判读
阈值设定：以基线信号3-15循环的荧光标准差10倍为阈值。
阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。
阴性对照：应无扩增信号（Ct值≥40或无信号）。
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