牛轮状病毒A组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛轮状病毒A组染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Bovine Rotavirus Group A Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3425 |
保存条件：-20℃避光保存，有效期24个月
适用样本：牛粪便、肠道组织等含病毒核酸的样本
检测方法：染料法荧光定量RT-PCR
检测类型：支持定性与定量检测（定量线性范围≥5个数量级）
试剂盒组成
RT-PCR反应预混液：包含逆转录酶、热启动DNA聚合酶、dNTPs、荧光染料等。
阳性对照：牛轮状病毒PCR阳性对照（1×10⁶拷贝/μL）。
阴性对照：无核酸酶水。
其他辅助试剂：如DEPC水、缓冲液等（具体以实际包装清单为准）。
实验操作流程
1. 样本制备
样本数量：若检测N个样品，需设置N+2个提取反应（额外1个阳性对照+1个阴性对照）。
阳性对照制备：取10μL阳性对照（1×10⁶拷贝/μL）稀释至与样本体积一致。
阴性对照：使用无核酸酶水。
核酸提取：推荐兼容市售细菌DNA提取试剂盒，按标准方法纯化核酸。
2. PCR扩增
反应体系：20μL/反应，包含模板DNA、预混液及对照。
扩增程序：
逆转录：50℃ 15分钟
预变性：95℃ 2分钟
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）
3. 结果分析
电泳验证：取5-10μL扩增产物进行1.5%-2.0%琼脂糖凝胶电泳，预期产物长度约200bp。
阴性对照要求：若阴性对照出现扩增条带，表明污染，实验需重做。
定量分析：通过标准曲线计算病毒拷贝数（需用户自备标准品）。
注意事项
实验环境：严格分区操作（样本处理区、PCR扩增区），避免气溶胶污染。
质量控制：每次实验必须包含阴阳性对照。
应用限制：本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。
存储与运输：避免反复冻融，运输需干冰保存。
技术参数
灵敏度：≤100拷贝/反应
特异性：不与牛其他常见肠道病原体交叉反应（如冠状病毒、诺如病毒）。
重复性：批内/批间变异系数（CV）≤5%。
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