鸡附红细胞体（鸡嗜血支原体）染料法荧光定量PCR试剂盒

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI系列（如7500、StepOnePlus）

安捷伦（MX3000P/3005P）

Roche LightCycler

Bio-Rad（CFX系列）

Eppendorf Mastercycler ep realplex

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green I染料法，通过特异性引物扩增鸡附红细胞体保守基因序列。特点包括：

高灵敏度：检测下限达100拷贝/反应。

高特异性：引物经优化设计，避免与其他生物DNA交叉反应。

即用型：预混反应液，仅需添加样品DNA模板。

多功能性：支持定性与绝对定量（线性范围≥5个数量级）。

自备试剂与耗材

待测样品DNA（建议纯度A260/A280为1.8-2.0）。

无菌PCR级水、离心管、无酶枪头。

操作流程

反应体系配制（冰上操作）：

按20μL体系混合预混液、引物、模板DNA（阴性/阳性对照需同步设置）。

PCR程序设置：

预变性：95℃ 2分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析（可选）：60℃升至95℃，验证扩增特异性。

质量控制

阳性质控：Ct值≤35，且呈典型S型扩增曲线。

阴性质控：Ct值≥40或无扩增信号。

无效实验判定：若质控结果不符，需重复检测。

结果判读

阳性：Ct<38，扩增曲线指数期明显。

可疑：38≤Ct<40，建议复测确认。

阴性：Ct≥40或无Ct值。

注意事项

防污染措施：

分设试剂配制区、样本处理区及扩增区。

使用带滤芯枪头，避免气溶胶污染。

试剂稳定性：

反复冻融≤3次，避免长时间室温放置。

假阳性/阴性处理：

排查环境或试剂污染（假阳性）。

确认DNA提取质量及试剂有效性（假阴性）。

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