革兰氏阳性细菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

采用SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，通过特异性引物靶向革兰氏阳性细菌保守基因区域，实现核酸扩增与荧光信号同步监测，支持定性和定量分析。

试剂盒组成

革兰氏阳性细菌通用扩增液：50μL×1管

革兰氏阳性细菌通用反应液：950μL×1管

阳性质控品：50μL×1管（无传染性DNA片段）

阴性质控品：50μL×1管

说明书：1份

注意事项：

不同批号组分不可混用。

试剂盒内组分可满足标称检测次数。

储存与运输

储存条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。

运输条件：2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad、LightCycler等），需自备无核酸酶耗材（离心管、滤芯吸头等）。

样本处理要求

采集：避免交叉污染，采样后立即检测或短期保存于-20℃，长期保存需-70℃以下（≤6个月）。

运输：2~8℃冰袋运送。

实验操作步骤

样本核酸提取：按规范提取样本DNA。

标准曲线制备（定量检测适用）：

使用试剂盒提供的阳性对照（10^8拷贝/μL）进行梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），每个稀释度设复孔。

PCR反应体系配制：

反应液与扩增液按比例混合，加入模板DNA。

上机检测：

设置扩增程序：预变性（95℃, 5min）→循环阶段（95℃ 10s, 60℃ 30s, 40 cycles）。

结果判读

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30且有典型扩增曲线。

待测样本Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需复测。

定量检测：根据标准曲线计算样本拷贝数。

注意事项

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断或食品检测。

操作需穿戴实验服、口罩及手套，避免污染。

重复冻融或保存不当可能导致试剂失效。

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