驴源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

驴源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green I 染料法荧光定量PCR技术，专用于快速、特异性检测食品、药品、饲料或其他样品中的驴源性成分（Donkey-derived DNA）。适用于物种真实性鉴定、原料溯源、掺假检测及市场监管等领域。

检测原理

DNA提取：样本中提取基因组DNA。

特异性扩增：针对驴线粒体DNA (mtDNA) 保守区域设计引物，仅扩增驴源性DNA片段。

荧光信号采集：SYBR Green I 染料嵌入双链DNA中，荧光强度与产物量正相关，实时监测扩增曲线。

定量/定性分析：通过Ct值判定样本中驴源性成分是否存在，标准曲线可实现半定量分析。

试剂盒组分

| 组分名称 | 体积/数量 | 用途说明 |

| 2× SYBR Green qPCR Master Mix | 1.25 mL | 含酶、dNTPs、染料、缓冲体系 |

| 驴源性引物混合液（干粉/冻干） | 2管 | 特异性引物（需复溶） |

| 阴性对照（NC） | 200 μL | 无菌超纯水 |

| 阳性对照（PC） | 200 μL | 已知浓度驴DNA标准品 |

| DNA提取试剂（可选） | 1套 | 柱式/磁珠法DNA提取试剂 |

技术参数

| 项目 | 性能指标 |

| 检测灵敏度 | ≤10拷贝/μL DNA |

| 特异性 | 不与非驴物种（马、牛、猪、羊等）交叉反应 |

| 线性范围 | 10²~10⁸ 拷贝/μL（R²≥0.99） |

| 重复性 | Ct值变异系数（CV）≤2.5% |

| 扩增效率 | 90%~110% |

操作步骤

1. DNA提取

使用配套试剂或商用DNA提取试剂盒处理样本，建议DNA浓度≥10 ng/μL。

2. PCR反应体系配制（20 μL体系）

| 组分 | 体积 |

| 2× SYBR Green Master Mix | 10 μL |

| 驴源性引物混合液 | 0.8 μL（终浓度0.4 μM） |

| DNA模板 | 2 μL |

| ddH₂O | 补足至20 μL |

对照设置：每批次需设阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

3. qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | - |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 30 sec | | |

| 熔解曲线 | 65℃→95℃ | 每0.5℃升 | 1 | 是 |

结果判读

阳性：

扩增曲线呈S"型，Ct值≤35；

熔解曲线为单一特异峰（Tm值：____±1℃）。

阴性：

无扩增曲线或Ct值≥40；

熔解曲线无峰或杂峰。

注意：35 < Ct < 40 需复测确认。

注意事项

实验全程在独立洁净区域操作，避免气溶胶污染。

使用前充分解冻混匀，避免反复冻融（建议分装）。

熔解曲线分析是区分非特异性扩增的关键步骤。

若检测复杂基质（如熟肉、加工食品），建议增加DNA纯化步骤。

质量控制

阳性对照：必须正常扩增（Ct值在预期范围内）。

阴性对照：无扩增信号（Ct值=40或Undetected）。

熔解曲线：阳性样本应为单峰，无杂峰。

应用场景

阿胶、肉制品、保健品中驴源性成分鉴定

饲料中违禁动物成分筛查

物种司法鉴定与溯源

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