染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Dye-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3230 |
产品概述
染料法荧光定量RT-PCR试剂盒基于SYBR Green I嵌合荧光染料,通过一步法实现反转录(RT)与实时定量PCR(qPCR)的同步进行。该技术适用于RNA或DNA模板的高灵敏度检测,广泛应用于基因表达分析、病原体检测及微生物定量等领域。
核心组分
2×预混缓冲液:含优化的反应体系及dNTPs,支持高效逆转录与扩增。
酶混合液:整合耐热逆转录酶及热启动Taq DNA聚合酶,确保高特异性和扩增效率。
无核酸酶水:用于反应体系配制。
阳性对照(部分试剂盒提供):用于验证实验有效性,避免假阴性。
技术参数
灵敏度:RNA检测下限达0.1 pg(高表达靶标),DNA可检测单拷贝。
动态范围:可分辨2倍浓度差异的模板。
稳定性:预混液在4℃下可稳定保存24小时。
兼容性:适配主流荧光定量仪器(No/Low/High Rox平台)。
操作流程
模板制备:提取RNA/DNA,建议使用配套核酸释放剂或兼容提取试剂盒。
反应体系配制:按比例混合预混液、酶、引物及模板(如20 μL体系含10 μL 2×缓冲液、0.5 μL酶、1 μL引物、1 μL模板,补水至终体积)。
程序设置:
逆转录:50℃ 10-30分钟(RNA模板需此步骤)。
预变性:95℃ 2-5分钟。
扩增:95℃ 10秒 → 60℃ 30秒(40循环),熔解曲线分析(可选)。
注意事项
防污染:建议在超净台或使用带滤芯枪头操作。
引物设计:需确保特异性,避免引物二聚体干扰。
保存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
应用示例
细胞基因表达分析:以293T细胞总RNA为模板,可稳定扩增不同GC含量靶标。
病原体检测:如病毒RNA(灵敏度达E2拷贝数)或克氏锥虫DNA。
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