检测原理
基于SYBR Green染料法的实时荧光PCR技术，针对GBS基因高度保守区设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增，实现定性及定量分析。
适用样本类型：临床样本（如阴道分泌物、尿液、血液等）、食品或环境样本中的GBS核酸检测。
产品名称 | 组链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Group B Streptococcus (GBS) Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3125 |
试剂盒组成
PCR预混液：含SYBR Green荧光染料、dNTPs、Taq DNA聚合酶及优化缓冲体系。
GBS特异性引物：针对目标基因设计的上下游引物（冻干粉或预混液形式）。
阳性对照：已知浓度的GBS DNA片段（非活体样本，避免生物污染风险）。
阴性对照：无核酸酶水或无关DNA模板。
模板稀释液：用于标准曲线制备或样本稀释。
操作步骤
1. 样本前处理
临床样本：按规范提取DNA（如使用柱式提取法或磁珠法），建议最终DNA浓度调整至10–100 ng/μL。
对照稀释：阳性对照需梯度稀释（如10^2–10^7拷贝/μL），每个稀释度单独使用带滤芯枪头操作，避免交叉污染。
2. PCR反应体系配制（以20 μL体系为例）
| 组分 | 体积（μL） |
| PCR预混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板DNA | 2 |
| 无核酸酶水 | 6 |
注意事项：
反应需设置技术重复（建议≥3孔）及阴性对照（NTC）。
避免气泡产生，短暂离心后上机。
3. 荧光定量PCR程序
| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃, 3 min | 1 |
| 变性 | 95℃, 15 s | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃, 30 s | |
| 熔解曲线分析 | 60–95℃ | 1 |
4. 结果判读
定性分析：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰，判为阳性；无Ct值或熔解曲线异常为阴性。
定量分析：通过标准曲线计算样本中GBS核酸拷贝数。
性能参数
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的GBS DNA。
特异性：不与A组链球菌或其他常见病原体核酸交叉反应。
线性范围：10^2–10^7拷贝/μL（R²≥0.99）。
储存与有效期
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（解冻后需短暂离心混匀）。
有效期：12个月。
注意事项
实验分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区分离），防止污染。
阳性对照需最后加入，并使用专用耗材。
熔解曲线异常可能提示引物二聚体或非特异性扩增，需优化条件。
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关键字： 组链球菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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