俄罗斯春夏脑炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 俄罗斯春夏脑炎病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Russian Spring-Summer Encephalitis Virus (RSSEV) Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3247 |
产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术,专用于俄罗斯春夏脑炎病毒(Russian Spring-Summer Encephalitis Virus, RSSEV)核酸的快速、高灵敏度检测。适用于科研领域,不可用于临床诊断。
产品特点
高特异性:基于病毒保守序列设计引物,与相近病原体无交叉反应。
高灵敏度:检测限可达数百拷贝/反应。
操作简便:预混反应体系(一管式检测),减少操作污染风险。
即用型设计:用户仅需提供病毒RNA样本,无需额外配制主反应液。
规格与成分
规格:50次/盒(20μL反应体系/次)
主要成分:
2×qPCR预混液(含荧光染料)
俄罗斯春夏脑炎病毒特异性引物混合物
阳性对照(1×10^8拷贝/μL,非活体DNA片段)
荧光PCR专用模板稀释液
实验步骤
样本准备
RNA提取:使用商业RNA提取试剂盒从样本中提取病毒RNA。
阳性对照稀释(梯度制备):
按10倍梯度稀释阳性对照(10^2–10^7拷贝/μL),独立操作以避免污染。
每稀释步骤需更换枪头,充分震荡混匀后冰浴备用。
PCR反应体系配制
在冰浴条件下按以下比例配制反应液(单次反应):
2×qPCR预混液:10 μL
特异性引物混合物:2 μL
模板RNA或阳性对照:2 μL
无核酸酶水:补足至20 μL
短暂离心混匀,避免气泡。
扩增程序设置
预变性:95℃ 3分钟(激活酶活性)。
循环扩增(40循环):
变性:95℃ 15秒
退火/延伸:60℃ 1分钟(采集荧光信号)
终延伸:72℃ 5分钟。
结果判读
通过荧光阈值(Ct值)定量分析,标准曲线由阳性对照梯度稀释生成。
无模板对照(NTC)应无扩增曲线,否则提示污染。
注意事项
分区操作:试剂配制、样本处理及扩增需在独立区域进行。
防护措施:穿戴实验服、手套,使用带滤芯枪头。
储存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融。
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