开心果源性成分染料法荧光定量PCR试剂盒

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用SYBR Green I染料法原理。染料可特异性嵌入双链DNA中，随扩增产物积累释放荧光信号，通过监测荧光强度变化实现对目标DNA的定量分析。引物针对开心果源性成分高度保守序列设计，确保检测的特异性。

产品组成

预混PCR反应液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及优化剂

开心果特异性引物混合液

阳性对照：含开心果源性DNA片段

阴性对照：无核酸酶水

SYBR Green I荧光染料

操作步骤

样本处理：

使用研磨器具均质化样本，按标准方法提取DNA（需自备提取试剂）。

DNA浓度建议调整至10–100 ng/μL。

反应体系配制（50 μL体系）：

预混PCR反应液 25 μL

引物混合液 2 μL

模板DNA 5 μL

SYBR Green I染料 1 μL

无核酸酶水补至50 μL

PCR程序设置：

预变性：95℃ 5分钟

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60℃–95℃，每0.5℃升温5秒

数据分析：

阈值循环数（Ct值）≤35且熔解曲线为单一峰，判为阳性。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的开心果DNA。

特异性：与常见坚果（如杏仁、核桃）无交叉反应。

重复性：批内/批间变异系数（CV）<5%。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免DNA污染。

阳性对照与待测样本需分区域处理，防止交叉污染。

熔解曲线异常可能提示非特异性扩增，需重新验证引物特异性。

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