三代虫染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 三代虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Gyrodactylus Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3269 |
检验原理
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，特点如下：
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。
高特异性：引物针对三代虫高度保守区设计，避免与其他生物DNA交叉反应。
双重用途：支持定性与定量分析，定量线性范围≥5个数量级。
即开即用：预混优化试剂，减少操作步骤。
运输与保存
运输条件：低温运输（建议冰袋或干冰）。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
自备试剂与仪器
需用户准备：
样品DNA模板
无菌PCR级水（用于稀释）
适用仪器：
ABI系列、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等荧光定量PCR仪。
使用方法
1. 标准曲线制备（以10^1–10^6拷贝/μL为例）
稀释步骤：
标记6管（6–1号），每管加45μL模板稀释液。
6号管加5μL阳性对照（10^7拷贝/μL），震荡混匀，得10^6拷贝/μL标准品。
依次梯度稀释至10^1拷贝/μL（每步更换枪头）。
2. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 | 终浓度 |
| 2×预混MasterMix | 10μL | 1× |
| 引物（自备） | 0.2μM each | 0.1–0.5μM |
| 模板DNA | 2μL | — |
| ROX校正染料（可选）| 按仪器要求添加 |
3. 反应程序
预变性：95℃ 5分钟；
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
注意事项
操作分区：试剂配制、样本处理需在不同区域进行，避免污染。
阳性对照：试剂盒提供非传染性DNA片段作为阳性对照，无需活体样本。
数据分析：建议使用仪器配套软件，阈值循环数（Ct值）判定结果。
质量控制
阴性/阳性对照：每批次实验需包含，确保试剂有效性。
重复性：建议每个样本设3个复孔，CV值应<5%。
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