检测原理
基于SYBR Green染料法实时荧光PCR技术，针对皮炎外瓶霉基因保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增，实现定性及定量分析。
包装规格：50次/盒。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
产品名称 | 皮炎外瓶霉染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Exophiala dermatitidis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3338 |
试剂盒组成
扩增反应液：含PCR缓冲液、dNTPs、SYBR Green染料等。
阳性对照：皮炎外瓶霉特异性核酸模板（需单独存放，避免污染）。
阴性对照：无核酸酶水。
酶混合物：含热启动Taq DNA聚合酶。
样本要求
样本类型：临床标本（如组织、体液）、环境样本或培养物。
采集与保存：
常规方法采集，避免污染。
短期运输需低温（冰袋或干冰），长期保存于-20℃。
自备试剂：样本DNA提取试剂（如柱式或磁珠法提取试剂）。
操作步骤
样本处理：
提取样本DNA，建议使用商品化核酸提取试剂盒。
测定DNA浓度并调整至适宜范围（如20–100 ng/μL）。
反应体系配制：
按说明书比例混合扩增液、酶及模板DNA，总体积通常为20–25 μL。
避免气泡，短暂离心后上机。
PCR程序设置：
预变性：95℃ 2–5分钟。
扩增循环：95℃ 10–15秒，60℃ 30–60秒（40–45循环）。
熔解曲线分析：60–95℃（染料法必需步骤）。
注意事项
防污染措施：
分区域操作（样本处理、试剂配制、扩增区分离）。
使用一次性耗材（吸头、手套），实验后以10%次氯酸或75%乙醇清洁台面。
试剂使用：
所有组分使用前需完全融化并混匀，避免反复冻融。
反应液需避光保存。
质量控制：
每批实验需包含阴/阳性对照，确保无假阳性或假阴性。
熔解曲线应呈现单一峰，否则需排查非特异性扩增。
结果判读
阳性：Ct值≤35，且熔解曲线与阳性对照一致。
可疑：Ct值35–40，建议重复检测。
阴性：无扩增曲线或Ct值＞40。
局限性
检测结果需结合临床或其他实验室数据综合判断。
极低浓度样本（＜10拷贝/μL）可能影响准确性。
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