产品概述
本试剂盒采用染料法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测内罗毕羊病病毒（NSDV）核酸，具有高特异性、灵敏度（可达几百拷贝/反应）和快速检测特点。适用于临床样本、动物组织及环境样本的病毒检测。
产品名称 | 内罗毕羊病病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Nairobi Sheep Disease Virus (NSDV) Dye-based qRT-PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3360 |
产品组成
2×qPCR MagicMix：500 μL（预混含荧光染料，最大吸收光谱471 nm，结合DNA后为500 nm，发射光谱530 nm）。
荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（用于阳性对照梯度稀释）。
NSDV特异性引物混合物：100 μL（针对病毒保守序列设计，无交叉反应）。
阳性对照（1×10⁸ 拷贝/μL）：50 μL（需独立稀释，避免污染）。
使用手册：1份。
注：需自备DNA模板、10×ROX（根据机型需求）。
样本处理
液体样本：取2-3 mL，13,000 rpm离心3分钟，弃上清，沉淀加50 μL DNA抽提液混匀，100℃裂解10分钟，离心后取5 μL上清用于PCR。
其他样本：按常规方法采集，-20℃保存，运输需泡沫箱加冰密封。
操作步骤
阳性对照稀释
标记6管，依次加入45 μL稀释液，梯度稀释阳性对照（10⁷–10² 拷贝/μL），每步换枪头并充分震荡。
稀释需在独立区域进行，避免污染。
PCR反应
反应体系：20 μL/反应（含5 μL模板）。
程序：
预变性：92℃ 5分钟；
扩增（30循环）：94℃ 60秒 → 50℃ 60秒 → 72℃ 60秒；
信号采集：复性或延伸阶段（530 nm）。
结果判读
阳性：Ct值<35，S型曲线；
阴性：Ct值>38或无Ct值；
可疑：Ct值35–38需复检，重复阳性则判定为阳性。
注意事项
操作分区进行，避免交叉污染；
试剂使用前充分混匀，避光保存；
实验后工作台需用10%次氯酸或75%酒精消毒；
阳性对照单独存放，运输保存期限1年（-20℃）。
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