产品概述
本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于检测耐万古霉素肠球菌（VRE）的vanA/vanB基因。适用于科研领域，具有高灵敏度、高特异性及即开即用的特点，可完成50次20μL体系的荧光定量PCR反应。
产品名称 | 耐万古霉素肠球菌vanA/vanB双重染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Vancomycin-Resistant Enterococcus (vanA/vanB) Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3364 |
检验原理
通过针对vanA/vanB基因高度保守区域设计特异性引物，利用荧光染料（如SYBR Green）与双链DNA结合释放信号的特性，实时监测PCR扩增过程中的荧光强度，实现目标核酸的定性与定量分析。
试剂组成
VRE扩增预混液：包含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。
阳性对照：浓度为1×10⁸拷贝/μL的vanA/vanB基因片段。
模板稀释液：用于标准曲线制备。
阴性对照：无核酸酶水。
操作步骤
标准曲线制备
标记6管，依次加入45μL模板稀释液。
梯度稀释阳性对照（10⁸~10³拷贝/μL），每步震荡混匀，冰上保存。
样品DNA制备
使用兼容的核酸纯化方法提取样本DNA，并设置阴阳性对照（N+2原则）。
qPCR反应体系
反应体系：20μL/反应，含10μL预混液、2μL模板、上下游引物各0.5μL、7μL无核酸酶水。
程序设置：
预变性：95℃ 3分钟；
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
数据分析
通过标准曲线计算样本中vanA/vanB基因拷贝数，阈值循环数（Ct值）≤35判定为阳性。
性能参数
灵敏度：最低检测限10³拷贝/μL。
特异性：不与常见肠道菌群DNA交叉反应。
线性范围：10³~10⁸拷贝/μL（R²≥0.99）。
注意事项
仅限科研使用，不可用于临床诊断。
避免反复冻融试剂，操作需在无菌环境下进行。
不同仪器需优化扩增参数。
储存与运输
储存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
运输方式：冰袋低温运输。
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