肠出血性大肠杆菌O104:H4血清型染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

肠出血性大肠杆菌O104:H4血清型染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用染料法荧光定量PCR技术（如SYBR Green I），通过特异性引物扩增肠出血性大肠杆菌O104:H4血清型的保守基因序列（如志贺毒素基因或紧密黏附素基因）。染料与双链DNA结合后释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定性与定量分析，适用于粪便、食品样本及环境拭子等检测。

核心特点

高特异性：引物针对O104:H4血清型设计，与其他大肠杆菌（如O157:H7）无交叉反应。

高灵敏度：检测限低至几百拷贝/反应。

操作便捷：预混反应液（2×qPCR MagicMix），即开即用。

防污染设计：一管式闭管操作，减少气溶胶污染风险。

试剂组成（50次反应）

| 成分 | 规格/包装 | 功能说明 |

| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管） | 含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲液 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（黄盖） | 样本及对照稀释 |

| O104:H4 PCR引物混合物 | 100μL（白盖） | 特异性扩增目标基因 |

| 阳性对照（O104:H4 DNA） | 50μL（红盖） | 定量标准品（1×10⁸拷贝/μL） |

| 阴性对照（超纯水） | 1mL（无色盖） | 污染监控 |

操作流程

样本DNA制备

样本类型：粪便、食品或环境拭子。

提取方法：推荐柱式DNA提取试剂盒，或100℃裂解10分钟（需离心取上清）。

反应体系配制（20μL）

冰上按比例混合以下组分：

2×qPCR MagicMix：10μL

引物混合液：2μL

模板DNA：2μL（建议浓度≤100ng/μL）

超纯水补足至20μL。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60℃~95℃（仅染料法需此步骤）。

注意事项

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

质量控制：每次实验需包含阳性对照和阴性对照，Ct值异常需重复检测。

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