产品用途

科研用途,用于偶发分枝杆菌(Mycobacterium fortuitum)的定性或定量检测。
产品名称 | 偶发分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Mycobacterium fortuitum Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3536 |

试剂盒组成

PCR反应液:包含优化后的特异性引物、探针、dNTPs、缓冲液等。
阳性对照:1×10^8拷贝/μL的偶发分枝杆菌DNA标准品。
DEPC-H2O:无核酸酶水,用于稀释标准曲线。
ROX参比染料(根据机型选配)。
操作步骤

DNA提取(样本制备区)
使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA,确保纯度(A260/A280比值1.8-2.0)。
标准曲线制备(独立区域操作)
标记6管,编号7至2,每管加45 μL DEPC-H2O。
梯度稀释阳性对照:
7号管:加5 μL阳性对照(1×10^8拷贝/μL),震荡混匀,得1×10^7拷贝/μL标准品。
依次稀释至2号管,最终浓度范围为1×10^7至1×10^2拷贝/μL。
PCR反应体系配置(反应配制区)
每20 μL反应体系包含:
10 μL PCR反应液
2 μL DNA模板(样本或标准品)
0.5 μL ROX(根据机型需求)
7.5 μL DEPC-H2O
荧光定量PCR程序
预变性:95℃ 3分钟。
循环阶段(40 cycles):
95℃ 15秒
60℃ 30秒(采集荧光信号)
数据分析
定性检测:Ct值≤35判定为阳性。
定量检测:以标准曲线(log拷贝数 vs. Ct值)计算样本浓度。
性能参数

灵敏度:可检测低至100拷贝/反应。
特异性:针对偶发分枝杆菌保守序列设计,无交叉反应。
稳定性:-20℃保存有效期12个月,避免反复冻融。
注意事项

分区操作(样本制备、反应配制、扩增区),避免污染。
阳性对照需独立处理,防止污染其他组分。
本试剂盒仅限科研使用,不适用于临床诊断。
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关键字: 偶发分枝杆菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;