产品用途
科研用途，用于偶发分枝杆菌（Mycobacterium fortuitum）的定性或定量检测。
产品名称 | 偶发分枝杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Mycobacterium fortuitum Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3536 |
试剂盒组成
PCR反应液：包含优化后的特异性引物、探针、dNTPs、缓冲液等。
阳性对照：1×10^8拷贝/μL的偶发分枝杆菌DNA标准品。
DEPC-H2O：无核酸酶水，用于稀释标准曲线。
ROX参比染料（根据机型选配）。
操作步骤
DNA提取（样本制备区）
使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，确保纯度（A260/A280比值1.8-2.0）。
标准曲线制备（独立区域操作）
标记6管，编号7至2，每管加45 μL DEPC-H2O。
梯度稀释阳性对照：
7号管：加5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得1×10^7拷贝/μL标准品。
依次稀释至2号管，最终浓度范围为1×10^7至1×10^2拷贝/μL。
PCR反应体系配置（反应配制区）
每20 μL反应体系包含：
10 μL PCR反应液
2 μL DNA模板（样本或标准品）
0.5 μL ROX（根据机型需求）
7.5 μL DEPC-H2O
荧光定量PCR程序
预变性：95℃ 3分钟。
循环阶段（40 cycles）：
95℃ 15秒
60℃ 30秒（采集荧光信号）
数据分析
定性检测：Ct值≤35判定为阳性。
定量检测：以标准曲线（log拷贝数 vs. Ct值）计算样本浓度。
性能参数
灵敏度：可检测低至100拷贝/反应。
特异性：针对偶发分枝杆菌保守序列设计，无交叉反应。
稳定性：-20℃保存有效期12个月，避免反复冻融。
注意事项
分区操作（样本制备、反应配制、扩增区），避免污染。
阳性对照需独立处理，防止污染其他组分。
本试剂盒仅限科研使用，不适用于临床诊断。
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