牛病毒性腹泻病毒1型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛病毒性腹泻病毒1型染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Bovine Viral Diarrhea Virus Type 1 (BVDV-1) Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3664 |
产品概述
本试剂盒基于荧光定量PCR技术，针对牛病毒性腹泻病毒1型（BVDV-1）基因组高度保守区域设计特异性引物和探针，通过实时监测荧光信号实现病毒核酸的定性检测。适用于临床样本、动物组织或培养物中BVDV-1的快速筛查和定量分析。
检测原理
采用染料法（如TB Green Premix Ex Taq II），在PCR扩增过程中，染料与双链DNA结合释放荧光信号，通过荧光定量PCR仪实时监测扩增曲线，根据Ct值判定结果。
试剂盒组分
PCR预混液：包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。
引物与探针（示例序列）：
上游引物：5'-GCAGCACCCTATCAGGCTGT-3'
下游引物：由用户提供或参考相关标准（如DB51T 3015-2023）。
阳性对照：含BVDV-1靶序列的质粒或灭活病毒。
阴性对照：无核酸酶水。
DEPC处理水：用于反应体系补足。
操作步骤
样本处理：提取待测样本RNA，反转录为cDNA。
反应体系配制（20μL）：
预混液：10μL
上、下游引物：各1.0μL
cDNA模板：1.5μL
DEPC水：补至20μL
PCR程序：
预变性：95℃ 1分钟；
扩增：95℃ 15秒→51℃ 30秒，共40循环；
熔解曲线分析：95℃ 15秒→60℃ 1分钟→95℃ 15秒（可选）。
结果判定
阈值设定：以仪器噪声为基准，阈值线需超过阴性对照扩增曲线的最高点。
阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈典型S型；
阴性判定：无Ct值或Ct值＞40。
注意事项
试剂保存于-20℃，避免反复冻融。
操作需在无菌环境下进行，防止污染。
建议每批次实验设置阴阳性对照。
性能参数
灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的病毒核酸。
特异性：引物经优化，不与BVDV-2或其他常见牛源病原体交叉反应。
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