细颈线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 细颈线虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Capillaria spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3671 |
产品特点
即开即用：用户仅需提供待测DNA模板，试剂盒包含预混优化引物、染料及阳性对照。
高灵敏度：检测限可达几百拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。
高特异性：引物针对细颈线虫高度保守区设计，避免与其他病原体DNA/RNA交叉反应。
质量控制：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，便于区分假阴性结果。
双重功能：支持定性与定量检测，定量分析时需通过标准曲线计算拷贝数。
操作流程
标准曲线制备（以10²~10⁷拷贝/μL梯度为例）
标记离心管：编号为2~7号，分别加入45 μL荧光PCR专用模板稀释液。
梯度稀释：
7号管：加入5 μL试剂盒提供的阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），震荡混匀，得到1×10⁷拷贝/μL标准品。
依次稀释至2号管，每次更换枪头，最终获得6个浓度梯度的标准曲线样品。
保存：稀释后样品置于冰上备用，避免反复冻融。
样品DNA制备
使用兼容的核酸纯化方法提取待测样本DNA，建议设置N+2个重复（含阳性与阴性对照）。
纯化后DNA应避免降解，建议立即检测或-20℃保存。
荧光定量PCR反应
体系配置：按20μL/反应配制，包含预混PCR缓冲液、引物、荧光染料及模板DNA。
程序设置：
预变性：95℃ 5分钟
循环阶段：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40个循环，荧光信号采集）
数据分析：
定性检测：直接观察Ct值判定阳性/阴性。
定量检测：根据标准曲线计算样本拷贝数。
注意事项
分区操作：标准品稀释与样本处理需在独立区域进行，避免气溶胶污染。
质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板对照）以排除污染。
仪器兼容性：若使用需ROX校正的机型，需额外添加10×ROX参照染料。
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