产品特点
高特异性:针对恩杜姆病毒保守序列设计引物,无交叉反应。
高灵敏度:检测下限可达数百拷贝/反应。
即开即用:预混反应体系(含荧光染料),用户仅需提供模板RNA。
一管式检测:闭管操作减少污染风险。
双功能检测:支持标准曲线法定量(线性范围≥5个数量级)及阈值法(Ct值)定性分析。
产品名称
恩杜姆病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
英文名称
Ndumu Virus Dye-based qRT-PCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR3564
试剂盒组成
2×qPCR MagicMix(含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料,棕色管,500μL)
荧光PCR专用模板稀释液(黄盖,1 mL)
阳性对照(无传染性DNA片段,1×10^8拷贝/μL)
阴性对照(无RNA酶水)
操作步骤
1. 样本制备
提取待测样本RNA,建议使用商品化RNA提取试剂盒。
若需定量检测,需稀释阳性对照至10^2~10^7拷贝/μL(6个梯度),独立操作避免污染。
2. PCR反应体系配制(20μL/反应)
| 组分 | 体积(μL) |
| 2×qPCR MagicMix | 10 |
| 引物探针混合液 | 2 |
| 模板RNA | 2 |
| 无RNA酶水 | 6 |
3. PCR扩增程序
预变性:92℃ 5分钟
循环阶段(30个循环):
92℃ 15秒
54℃ 30秒(荧光信号采集)
72℃ 30秒
4. 数据分析
定量检测:以标准曲线计算样本拷贝数(log值)。
定性检测:
阳性:Ct≤35,扩增曲线典型;
阴性:Ct≥40;
可疑(35<Ct<40):需复测确认。
注意事项
操作区需分区(样本处理、PCR配制、扩增),避免气溶胶污染。
阳性对照需最后加入,使用带滤芯枪头。
试剂解冻后需涡旋混匀,避免反复冻融。
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