产品介绍:

实验原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。预先包被小鼠纤维蛋白原捕获抗体的微孔板中,依次加入标准品、待测样本和HRP标记的检测抗体,经过温育和彻底洗涤后,加入底物TMB显色。在过氧化物酶催化下,TMB转化为蓝色,再经酸终止反应变为黄色。颜色深浅与样本中纤维蛋白原浓度呈正相关,通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样本浓度。
产品名称 | 小鼠纤维蛋白原(FG)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Mouse FG ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A106148 |

试剂盒组成

预包被微孔板:已包被捕获抗体的96孔或48孔板。
标准品:已知浓度的纤维蛋白原标准品。
检测抗体-HRP:辣根过氧化物酶标记的检测抗体。
底物溶液:TMB底物液。
终止液:用于终止酶促反应的酸性溶液。
洗涤缓冲液:用于洗涤未结合成分。
样品稀释液:用于稀释待测样本。
其他:封板膜、说明书等。
样本处理
血清:全血室温放置2小时或4℃过夜,离心取上清。
血浆:使用EDTA或肝素抗凝,离心取上清。
组织匀浆:组织剪碎后,用预冷PBS匀浆,离心取上清。
细胞培养上清:离心去除细胞 debris,取上清检测。
操作步骤

准备:试剂盒平衡至室温,设置标准品孔和样本孔。
加样:加入标准品、样本和HRP标记的检测抗体。
温育:37℃水浴或恒温箱温育60分钟。
洗涤:吸干孔内液体,加入洗涤液,重复洗涤5次。
显色:加入底物液,避光孵育15分钟。
终止:加入终止液,终止反应。
测定:酶标仪450nm波长下测定OD值。
性能指标

检测范围:0.25g/L-8g/L。
灵敏度:最低检测浓度小于0.1g/L。
特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性:板内变异系数小于10%,板间变异系数小于15%。
注意事项
严格按照规定时间和温度进行温育。
洗板不正确可导致不准确结果。
避免试剂和样本的交叉污染。
使用前确保所有试剂达到室温。
试剂与样本准备阶段:

温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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