产品介绍:

产品名称 | 小鼠组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)ELISA试剂盒 | 英文名称 | Mouse tPA ELISA Kit |
规格 | 48T/96T | 货号 | A115450 |
检测原理
双抗体夹心法:酶标板包被抗小鼠tPA抗体,加入样本或标准品后,tPA与包被抗体结合。随后加入生物素标记的抗tPA抗体,形成复合物。加入辣根过氧化物酶标记的亲和素,催化底物显色,颜色深浅与tPA浓度正相关,通过酶标仪测定OD值,计算样本浓度。

主要参数

灵敏度:23.44 pg/mL。
检测范围:39.06-2500 pg/mL。
特异性:特异性识别小鼠tPA,与其他类似物无交叉反应。
精密度:批内变异系数(CV)<10%,批间CV<15%。
试剂盒组成

预包被抗体的96孔板、标准品、生物素化抗体、HRP标记亲和素、洗涤液、底物液、终止液等。
适用样本
血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆液等。
操作步骤
加样:加入标准品或样本,37℃孵育。
洗涤:去除未结合物质。
加抗体:加入生物素化抗体,孵育后洗涤。
加酶结合物:加入HRP标记亲和素,孵育后洗涤。
显色:加入底物液显色,终止反应后测定OD值。
保存条件
储存温度:2-8℃。
有效期:6个月。
注意事项

样本处理:避免溶血和高血脂样本,及时检测或分装冻存。
试剂平衡:试剂盒取出后需室温平衡30分钟。
洗涤彻底:手工或自动洗板需彻底,避免残留影响结果。
避免污染:使用一次性吸头,避免交叉污染。
应用领域
科研研究:用于血栓形成、溶栓治疗、血管疾病等领域的研究。
疾病机制:探索tPA在疾病发生发展中的作用。
试剂与样本准备阶段

温度平衡(最容易被忽视的点)
操作: 从冰箱取出的试剂盒(包括标准品、酶标试剂、样品等)必须在室温(18-25℃)下平衡 30 分钟。
后果: 冷试剂直接使用会导致孔内温差,产生冷凝水或非特异性背景,严重影响 OD 值。
试剂配制
洗涤液: 浓缩洗涤液如果在低温下保存可能会有结晶析出。配制时必须确保结晶完全溶解并混匀。
现用现配: 酶标试剂和显色液(如 TMB)对光和热敏感,建议在使用前配制工作液,避免失效。
样本处理
避免溶血: 血清样本如果发生溶血(红细胞破裂),会释放过氧化物酶,导致假阳性或背景过高。
离心去杂质: 血液或细胞上清样本在加样前最好进行离心,去除沉淀和悬浮物,防止堵塞孔底或干扰读数。
稀释倍数: 如果样本浓度过高,超出标准曲线范围,必须进行预实验确定稀释倍数。计算结果时记得乘以稀释倍数。
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ELISA试剂盒的主要优点
ELISA之所以被广泛应用,主要归功于以下几个核心优势:
灵敏度高(抓得准):
它利用酶的催化放大作用,能将微弱的信号放大,因此可以检测到样本中极低浓度的目标物质(甚至达到皮克级 pg/mL)。哪怕样本里只有微量的病毒、激素或蛋白质,它也能“捕捉”到。
特异性强(瞄得准):
基于抗原-抗体的特异性结合原理,试剂盒中的抗体通常只与目标物质反应,很少受样本中其他杂质的干扰。这大大降低了假阳性率,结果准确可靠。
操作简便且快速:
相比于一些复杂的仪器分析方法,ELISA的操作流程相对标准化。市面上的试剂盒通常是一套完整的组件,按照说明书进行加样、孵育、洗板、显色即可。整个过程通常在几小时内就能完成。
高通量与适用性广:
它通常采用96孔板或48孔板,一次实验可以同时处理几十个样本,非常适合大规模的流行病学筛查或批量科研实验。此外,它不仅能测蛋白,还能测抗体、激素、药物残留甚至农药,应用领域覆盖了医学、食品安全和环境监测。
安全稳定:
不像放射免疫法那样使用放射性同位素,ELISA使用的是酶标记,对人体和环境无辐射危害,且试剂保存时间较长。
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