基本描述
产品名称：重组肠激酶
规格或纯度：无动物源,无载体,生物活性,ActiBioPure™,EnzymoPure™,≥10U/μl
产品介绍：
重组牛肠激酶是一种高纯度的重组牛肠激酶轻链片段。该酶经高效液相色谱（HPLC）纯化，纯度高、特异性高，不含其他蛋白酶。肠激酶可切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键，具体序列为天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 天冬氨酸 - 赖氨酸（DDDDK）。其适用范围广，能在较宽的 pH 范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白，还可去除位于蛋白质 N - 末端的融合蛋白，从而除去不需要的融合标签。
细胞定位： Membrane; Single-pass type II membrane protein
序列相似性： Belongs to the peptidase S1 family.
推荐使用方法
1）25℃酶切条件
按照酶活性定义，酶切条件举例如下：
在 25mM Tris-HCl（pH8.0）体系中：
融合蛋白浓度为 0.1-1mg/ml（蛋白总量 50-100μg）
重组肠激酶（EK）用量为 0.1-0.2U
于 25℃过夜酶切，或需 16-24h 实现完全酶切，酶切效果可通过十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测。
2）4℃低温酶切条件
4℃环境下可对底物进行有效酶切，但需将酶切时间延长至 48-64h，或增加 2-3 倍酶量。
3）酶切优化和放大
优化：可对酶切条件进行优化，如缓冲液 pH、融合蛋白浓度、肠激酶（EK）用量及酶切时间等，确保融合蛋白在稳定条件下被酶切，酶切效果通过 SDS-PAGE 检测。
放大：选择优化后的反应条件，按该条件等比例放大酶切反应，酶切效果通过 SDS-PAGE 检测。
去除重组肠激酶的方法
使用胰蛋白酶抑制剂亲和层析去除重组肠激酶。
注意：不建议在 37℃条件下进行酶切，此温度下可能出现非特异性酶切。
储存和运输稳定性
酶液储存稳定性：-20℃条件下，12 个月内稳定；25℃条件下，一周内无活性损失。缓冲体系为 50mM Tris-HCl（pH8.0）、250mM NaCl、2mM Ca²⁺、50% 甘油。
酶液反复冻融稳定性：反复冻融 5 次，酶无活性损失。
运输稳定性：采用蓝冰保温运输，酶保持稳定。
常见影响肠激酶活性的因素
当体系中存在＞200mM 咪唑、或＞200mM NaCl、或＞5% 甘油时，酶切效果会受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：
1）为获得理想酶切结果，建议将样品透析到 25mM Tris-HCl（pH8.0）缓冲液中，再进行酶切。
2）若不便透析，可将样品稀释，使咪唑含量在 100mM 以下、NaCl 浓度在 50mM 以下、甘油浓度小于 5%，之后进行酶切，酶的用量与蛋白的比例保持不变（即 1U 酶可切割 500μg 蛋白）。
3）若样品溶液中含有上述影响成分中的一种或多种，且不便去除，此时可适当增加酶量或延长酶切时间，同样可达到较好的酶切效果。
生物活性：≥10U/μl
无载体：Yes
无动物源：Yes
Accession #：P98072
预测分子量：25.8 ±2.6kDa
级别：无动物源, 无载体, 生物活性, ActiBioPure™, EnzymoPure™
产品规格参数
储存缓冲液：50mM Tris-HCl, 250mM NaCl, 2mM Ca²⁺, 50% Glycerol, pH8.0.
浓度：≥10U/μl
储存温度：-20°C储存
运输条件：超低温运输
CAS编号和信息：9014-74-8
酶学委员会编号：EC 3.4.21.9
单位定义：1U 定义为在 25℃， 12h~16h 之内， 将 0.5mg 保存于 25mM Tris-HCl 8.0 缓冲液中的融合蛋白切割 95%所需的酶量
功能和特点
Accession #：P98072
生物活性：≥10U/μl
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关键字： 重组牛肠激酶;Enterokinase ; EK ; Enteropeptidase
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